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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 一个关于农杆菌菌液PCR的问题
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winding1136

银虫 (正式写手)

[交流] 一个关于农杆菌菌液PCR的问题

农杆菌是感受态转化后摇出来的，摇了大概15个小时，有点浓，PCR之后什么条带都没有，用的是来P启动子和目的基因的两对引物，转化前的大肠杆菌质粒能P的出来，转化后却P不出来，作过2次转化了,P过7.8次都没有，有谁有类似经验的吗？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-31 at 22:57 ]
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1楼 2008-12-26 10:22:22
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bbyu007

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by winding1136 at 2008-12-26 10:22:
农杆菌是感受态转化后摇出来的，摇了大概15个小时，有点浓，PCR之后什么条带都没有，用的是来P启动子和目的基因的两对引物，转化前的大肠杆菌质粒能P的出来，转化后却P不出来，作过2次转化了,P过7.8次都没有，有谁 ...

正解~~~~~~~~~~~~~~~
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我是笨笨鱼~~~
3楼2008-12-29 17:58:10
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0): 8-22 13:02
这样做试试：
模板处理：取100ul菌液，4000rpm离心5min，弃上清，菌体用50---100ul水重新悬浮，取10ul，在PCR仪上99摄氏度加热5min，冷却后取1---2ul作模板。

如果还是做不出来，农杆菌提质粒做PCR看看能否出来。

[ Last edited by 香菱儿 on 2008-12-29 at 16:56 ]
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2008-12-29 16:54:48
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