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winding1136

银虫 (正式写手)

[交流] 一个关于农杆菌菌液PCR的问题

农杆菌是感受态转化后摇出来的,摇了大概15个小时,有点浓,PCR之后什么条带都没有,用的是来P启动子和目的基因的两对引物,转化前的大肠杆菌质粒能P的出来,转化后却P不出来,作过2次转化了,P过7.8次都没有,有谁有类似经验的吗?

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-31 at 22:57 ]
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0): 8-22 13:02
这样做试试:
模板处理:取100ul菌液,4000rpm离心5min,弃上清,菌体用50---100ul水重新悬浮,取10ul,在PCR仪上99摄氏度加热5min,冷却后取1---2ul作模板。

如果还是做不出来,农杆菌提质粒做PCR看看能否出来。

[ Last edited by 香菱儿 on 2008-12-29 at 16:56 ]
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
2楼2008-12-29 16:54:48
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bbyu007

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by winding1136 at 2008-12-26 10:22:
农杆菌是感受态转化后摇出来的,摇了大概15个小时,有点浓,PCR之后什么条带都没有,用的是来P启动子和目的基因的两对引物,转化前的大肠杆菌质粒能P的出来,转化后却P不出来,作过2次转化了,P过7.8次都没有,有谁 ...

正解~~~~~~~~~~~~~~~
我是笨笨鱼~~~
3楼2008-12-29 17:58:10
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