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咱小凉

新虫 (初入文坛)

[交流] 荧光原位杂交FISH镜检计数 已有3人参与

小妹用荧光原位杂交法,测样品中被荧光标记细菌总数。
1、杂交完后,制作好的载玻片,在普通荧光显微镜下观察就可以还是要激光共聚焦显微镜,有什么区别?如果要看一般放大多少倍合适。
2、镜检的时候怎么计数呢?文献只查到数十几个随机视野,求平均值。怎么把这个结果换算成cell/ml菌液。
3、是否可以用流式细胞计算细菌总数,比载玻片镜检有什么优缺?

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咱小凉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Cells-Qi at 2017-03-21 00:26:48
载玻片和盖玻片用前先用酒精浸泡八个小时以上,然后在用,用以净化玻片!

载玻片由于直接买的多聚赖氨酸包被的,就没浸泡直接用了。还有加菌液晾干后,三种浓度乙醇脱水时总觉得菌液会被冲洗掉,用的染色缸,侧面竖着泡进去的。杂交缓冲液50ul和探针5ul好像量太多,加盖玻片后就溢出来了,不知道有木有影响。

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7楼2017-03-21 01:20:00
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Cells-Qi

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我不是做细菌的,但是你这个用普通的荧光显微镜就好!计数一般一个视野,计上不记下,记左不记右吧!

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2楼2017-03-19 10:30:53
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咱小凉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Cells-Qi at 2017-03-19 10:30:53
我不是做细菌的,但是你这个用普通的荧光显微镜就好!计数一般一个视野,计上不记下,记左不记右吧!

有木有具体的方法呢?不过别说计数了,今天把做好的片子拿去看了,那边仪器的老师说找不到菌,看到的不知道是菌还是杂质,探针cy3标记的,然后dapi复染,暗视野紫外光只看到很少的几个蓝点,绿光下一片橙红色然后好多一粒一粒的颗粒连成片,不知道是不是菌。我甚至不知道应该是什么样的。第一次做感觉好绝望。也不知道方法对不对。

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3楼2017-03-20 16:48:37
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Cells-Qi

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-21 07:45:48
连成片可能是浓度太大,稍微稀释一下再做片子!菌的话一般四十倍镜下就能看到啦!

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4楼2017-03-21 00:22:14
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