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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 高效液相色谱 表征 蛋白质分子量
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强迫学习

新虫 (初入文坛)

[求助] 高效液相色谱 表征 蛋白质分子量 已有2人参与

想用高效液相色谱表征蛋白质分子交联前后分子量的变化。
    蛋白质的分子量在2.5-10万之间，资料上建议用C4的柱子。
    不知道流动相和PH值怎么选择。
    第一次用HPLC，急求大神们的帮助！！！！！！！！！！！！！
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1楼 2017-03-09 15:47:21
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分子量应该是用GPC表征的吧，文献题目有么

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2楼2017-03-09 23:22:03
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强迫学习

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2017-03-09 23:22:03
分子量应该是用GPC表征的吧，文献题目有么

实验室的GPC是用的氯仿，小麦醇溶蛋白不能溶解到氯仿里面。

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3楼2017-03-09 23:38:44
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 强迫学习 at 2017-03-09 23:38:44
实验室的GPC是用的氯仿，小麦醇溶蛋白不能溶解到氯仿里面。
...

蛋白应该用PBS流动相。另外，测分子量需要尺寸排阻原理，HPLC的柱子测不了分子量，换根GPC用的柱子吧

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4楼2017-03-09 23:43:32
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白质一般用SEC-HPLC吧，流动相一般是PB液，具体可以参照文献，pH（看色谱柱的范围和样品的稳定性）
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5楼2017-03-10 11:36:40
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强迫学习

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2017-03-09 23:43:32
蛋白应该用PBS流动相。另外，测分子量需要尺寸排阻原理，HPLC的柱子测不了分子量，换根GPC用的柱子吧
...

文献题目：小麦胚乳醇溶蛋白反相高效液相色谱分离方法的建立。
实验室现在有的高效液相色谱仪型号是：美国Waters公司的ALLIANCE E2695。
不知道能否做。

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6楼2017-03-10 16:51:14
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 强迫学习 at 2017-03-10 16:51:14
文献题目：小麦胚乳醇溶蛋白反相高效液相色谱分离方法的建立。
实验室现在有的高效液相色谱仪型号是：美国Waters公司的ALLIANCE E2695。
不知道能否做。
...

这个仪器可以测，但是测得是相对分子量，你需要买一组蛋白质标准品。检测器最好是UV，关键是色谱柱是不是用来分离蛋白那种
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7楼2017-03-10 17:22:13
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强迫学习

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2017-03-10 17:22:13
这个仪器可以测，但是测得是相对分子量，你需要买一组蛋白质标准品。检测器最好是UV，关键是色谱柱是不是用来分离蛋白那种...

我的实验目的是为了证明蛋白质交联成功，只要两组样品分子量有差别就可以了。
按文献中的条件可以做出来吗？
另外一般建议用C4的柱子可以吗？
没做过HPLC，请多多指教。?( 'ω' )?

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8楼2017-03-10 17:39:30
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xiaoLifeiD

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 强迫学习 at 2017-03-10 17:39:30
我的实验目的是为了证明蛋白质交联成功，只要两组样品分子量有差别就可以了。
按文献中的条件可以做出来吗？
另外一般建议用C4的柱子可以吗？
没做过HPLC，请多多指教。?( 'ω' )?
...

只测差别的话不用标样了，但是你为什么不直接测DLS？交联前后尺寸肯定有变化。C4柱子我没用过，你可以试试

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强迫学习
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9楼2017-03-10 17:45:25
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强迫学习

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by xiaoLifeiD at 2017-03-10 17:45:25
只测差别的话不用标样了，但是你为什么不直接测DLS？交联前后尺寸肯定有变化。C4柱子我没用过，你可以试试
...

第一次做这种测试，不太了解可以用哪些表征。
谢谢你的解答。

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10楼2017-03-11 11:10:01
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