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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 【求助】Q-PCR模板浓度最低可以为多少？
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739989560

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】Q-PCR模板浓度最低可以为多少？ 已有2人参与

由于样本比较珍惜，每次大概提取出18ul的cDNA的量，使用Qubit检测之后浓度最多只有20ng/ul左右，小的甚至只有2-3ng/ul。在做Q-PCR时，需要用模板cDNA验证4个基因+1个内参GAPDH，还需要每个设计3个重复孔。使用SBYR Green I进行定量PCR，每孔要加5ul的cDNA，大约需要的cDNA为15管x5ul=75ul。而实际只有18ul，故需要加57ul水稀释。这样的浓度大家觉得怎么样呢。因为样本珍惜，扩出cDNA也不容易，耗时耗试剂，每次几乎都是验证一轮就没有了。不知道可不可以将得到的18ul再分出10ul进行保存，剩下8ul来进行Q-pcr，意思就是加67ul水来稀释它，不知道这种方式会对Q-PCR的结果产生什么影响？
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1楼 2017-03-08 21:09:13
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739989560

新虫 (初入文坛)
2楼2017-03-10 17:02:57
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八爪鱼啊

新虫 (初入文坛)
感觉浓度有点低
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3楼2017-03-29 11:51:15
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小石头IX

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可不可以考虑减小反应体系
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4楼2017-06-19 11:02:53
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