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新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】Q-PCR模板浓度最低可以为多少? 已有2人参与

由于样本比较珍惜,每次大概提取出18ul的cDNA的量,使用Qubit检测之后浓度最多只有20ng/ul左右,小的甚至只有2-3ng/ul。在做Q-PCR时,需要用模板cDNA验证4个基因+1个内参GAPDH,还需要每个设计3个重复孔。使用SBYR Green I进行定量PCR,每孔要加5ul的cDNA,大约需要的cDNA为15管x5ul=75ul。而实际只有18ul,故需要加57ul水稀释。这样的浓度大家觉得怎么样呢。因为样本珍惜,扩出cDNA也不容易,耗时耗试剂,每次几乎都是验证一轮就没有了。不知道可不可以将得到的18ul再分出10ul进行保存,剩下8ul来进行Q-pcr,意思就是加67ul水来稀释它,不知道这种方式会对Q-PCR的结果产生什么影响?
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小石头IX

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可不可以考虑减小反应体系
4楼2017-06-19 11:02:53
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739989560

新虫 (初入文坛)

2楼2017-03-10 17:02:57
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