| 查看: 1728 | 回复: 2 | ||
[求助]
目的基因连到克隆载体和表达载体上转化大肠杆菌后克隆均长的少？ 已有1人参与
|
|
如题，目的基因属于转运蛋白（跨膜）基因， 2k的基因连到克隆载体，重组表达载体均顺利，转化大肠杆菌克隆较多。阳性率也可以，转化农杆菌也长的较多，阳性率高。 同一个家族的基因，同时做转化，4k多的基因在克隆载体表达载体上转化大肠杆菌克隆<10个，阳性率低或无阳性。转化农杆菌不长克隆。排除感受态及转化问题。有人说可能是基因有毒性？怎么理解基因毒性？试过平板放30度，培养基加葡萄糖，均不奏效。还有可能是什么原因？ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有67人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有1人回复
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
额，这里面原因太多了，目的基因和载体的酶切效果，连接体系的比例等等，本身大片段连接转化较小片段效率低一些，你是转化大肠杆菌后提质粒再转化农杆菌么？还是连接后同时转化两个菌？ 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-03-08 19:08:31
|
提完质粒转农杆菌。不是，我大片段也有重组上的，但是长的少，阳性少，把阳性克隆保存菌种再活化凃板还是长一两个克隆。有的摇菌也摇的慢。还有一个片段扩出来了死活重组不上，悲剧。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-03-09 09:28:49
