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目的基因连到克隆载体和表达载体上转化大肠杆菌后克隆均长的少？ 已有1人参与
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如题，目的基因属于转运蛋白（跨膜）基因， 2k的基因连到克隆载体，重组表达载体均顺利，转化大肠杆菌克隆较多。阳性率也可以，转化农杆菌也长的较多，阳性率高。 同一个家族的基因，同时做转化，4k多的基因在克隆载体表达载体上转化大肠杆菌克隆<10个，阳性率低或无阳性。转化农杆菌不长克隆。排除感受态及转化问题。有人说可能是基因有毒性？怎么理解基因毒性？试过平板放30度，培养基加葡萄糖，均不奏效。还有可能是什么原因？ 发自小木虫Android客户端 |
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原海亮
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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额，这里面原因太多了，目的基因和载体的酶切效果，连接体系的比例等等，本身大片段连接转化较小片段效率低一些，你是转化大肠杆菌后提质粒再转化农杆菌么？还是连接后同时转化两个菌？ 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-03-08 19:08:31
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提完质粒转农杆菌。不是，我大片段也有重组上的，但是长的少，阳性少，把阳性克隆保存菌种再活化凃板还是长一两个克隆。有的摇菌也摇的慢。还有一个片段扩出来了死活重组不上，悲剧。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-03-09 09:28:49