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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Ni柱纯化充足蛋白
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yml11

新虫 (初入文坛)

[求助] Ni柱纯化充足蛋白 已有2人参与

各位大神，请教一下。我的蛋白是24kDa左右，用Ni-NTA纯化蛋白，图一是梯度20，50，100，150，250，250，300，400，500mM咪唑洗脱的图。后选择400mM作为洗脱浓度，但这次做出来还是有很多杂蛋白，请问是怎么回事呢？图2倒数第三条带是洗脱合并后过10kDa超滤的结果。

Ni柱纯化充足蛋白


Ni柱纯化充足蛋白-1


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1楼 2017-03-07 21:10:27
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-08 07:41:50
再过一个离子交换柱吧，Ni柱很难达到一次性纯化的效果，除非你蛋白产量超高
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2楼2017-03-08 00:08:52
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酵母君HSJ

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
单单过亲和很难到达一步纯化的，我们还会过一次凝胶层析或者离子交换
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3楼2017-03-08 14:30:17
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yml11

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绝对零度的笑 at 2017-03-08 00:08:52
再过一个离子交换柱吧，Ni柱很难达到一次性纯化的效果，除非你蛋白产量超高

那过阴离子还是阳离子交换柱呀？

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4楼2017-03-09 10:51:48
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郭小勺

新虫 (初入文坛)
感觉蛋白有些降解

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5楼2017-03-09 20:49:20
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yml11 at 2017-03-09 10:51:48
那过阴离子还是阳离子交换柱呀？
...

阴离子交换柱居多吧，看你的蛋白等电点是多少了
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6楼2017-03-09 23:28:56
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辉102526

新虫 (初入文坛)
恩，Ni-400前多长时间低咪唑洗，或者再过阴阳柱

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7楼2017-03-13 00:45:41
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