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笨笨的云

铜虫 (初入文坛)

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在线: 7.6小时
虫号: 3814377
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性别: MM
专业: 微生物学

[求助] 加酶切位点后扩增不出来了，在线求助

原来扩的很容易，加了酶切位点和保护碱基后就再也扩不出来了，各种方法都试过了，退火温度，体系改变，做touchdown也试过，就是扩不出来，快急死了，求助各位给点ideal！

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活到老学到老

1楼 2017-03-07 12:32:30

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笨笨的云

铜虫 (初入文坛)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by 原海亮 at 2017-03-08 19:13:51
你的模板是什么呢，基因组还是质粒？加了酶切位点后，是什么都扩增不出来，还是扩增出来但特异性不好？实在不行用比较笨的方法，你可以用不加酶切位点的引物扩增，然后连接T载体，然后提质粒，再用加酶切位点的引物 ...

我用基因组做模板，扩出来什么条带都没有，今天准备做T克隆，连到T载体上用质粒扩会比基因组好扩一点吗？