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Nanoluc荧光素酶 已有1人参与
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跪求讲解 本人最近在做Nanoluc荧光素酶，与底物反应检测发光，刚开始能够找到一个浓度，使发光过程是一个抛物线先上后下的情况，后来相同浓度总是发光一直在降低，没有上升的趋势，后来不论增大还是减小浓度都是下降的趋势，底物什么都没变，请大神帮忙，温度有关吗？ 谢谢 |
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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这个和luciferase和renilla的检测原理都是一样的，属于酶催化的化学发光检测体系。有下面几点你需要明确。 信号的产生：化学发光的检测方法信号的产生是瞬时的，即酶催化底物产生产物的化学反应的过程中伴随着光的释放。 酶催化反应的动力学：酶催化反应是不间断的循环过程，这意味着随着反应时间的进行底物会不断的消耗，当底物减少时，酶催化底物产生产物的化学反应的效率会降低，光的释放减少，信号会发生衰减。 估计你的实验底物的量少了，只有底物的量远远大于酶量时，整个化学反应在以最大的速度进行时（酶的催化极限）时信号才能维持不变，还有记得酶混匀后检测，条件允许每隔30S做一次检测看看动力学变化 |
2楼2017-03-07 12:34:35