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geyihui

新虫 (小有名气)

[求助] Nanoluc荧光素酶 已有1人参与

跪求讲解
本人最近在做Nanoluc荧光素酶,与底物反应检测发光,刚开始能够找到一个浓度,使发光过程是一个抛物线先上后下的情况,后来相同浓度总是发光一直在降低,没有上升的趋势,后来不论增大还是减小浓度都是下降的趋势,底物什么都没变,请大神帮忙,温度有关吗?
谢谢
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个和luciferase和renilla的检测原理都是一样的,属于酶催化的化学发光检测体系。有下面几点你需要明确。
信号的产生:化学发光的检测方法信号的产生是瞬时的,即酶催化底物产生产物的化学反应的过程中伴随着光的释放。
酶催化反应的动力学:酶催化反应是不间断的循环过程,这意味着随着反应时间的进行底物会不断的消耗,当底物减少时,酶催化底物产生产物的化学反应的效率会降低,光的释放减少,信号会发生衰减。

估计你的实验底物的量少了,只有底物的量远远大于酶量时,整个化学反应在以最大的速度进行时(酶的催化极限)时信号才能维持不变,还有记得酶混匀后检测,条件允许每隔30S做一次检测看看动力学变化
2楼2017-03-07 12:34:35
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