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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)

[求助] Western blot不同标签蛋白同时被显影出来 已有2人参与

大家好,最近做western,两个蛋白相互作用,一个gst标签,一个是flag标签。在显影gst蛋白的时候,奇怪的是两种不同标签蛋白同时被显影出来,一抗二抗都换过,两种标签还是都能被显出来,大家帮忙分析下原因

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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)

5%牛奶block10分钟会影响么?

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2楼2017-03-07 00:43:53
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你确定没有抗体亚基的干扰吗?50 kDa和25 kDa。
3楼2017-03-07 09:20:55
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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)

有一个flag标签蛋白是108kd,gst抗体结合后也可以看到,奇怪了

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4楼2017-03-07 09:42:02
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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-03-07 09:20:55
你确定没有抗体亚基的干扰吗?50 kDa和25 kDa。

有一个flag标签蛋白是108kd,gst抗体结合后也可以看到,应该不是抗体亚基

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5楼2017-03-07 09:43:02
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bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
曝光时间过长可以将全部蛋白都显影出来
抗体应该没有问题 优化一下实验方案 可以做个ELISA当做预实验
降低一抗浓度 适当降低二抗浓度 缩短显影曝光时间
摸索一下条件

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2017-03-07 09:46:09
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bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手

多洗几次 5遍够了

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2017-03-07 09:46:37
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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by bush119 at 2017-03-07 09:46:09
曝光时间过长可以将全部蛋白都显影出来
抗体应该没有问题 优化一下实验方案 可以做个ELISA当做预实验
降低一抗浓度 适当降低二抗浓度 缩短显影曝光时间
摸索一下条件

谢谢!我试试~

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8楼2017-03-07 14:17:20
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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by bush119 at 2017-03-07 09:46:37
多洗几次 5遍够了

好的,我试试看

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9楼2017-03-07 14:17:47
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柒柒柒柒哒

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

10楼2018-10-31 09:23:40
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