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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » Western blot不同标签蛋白同时被显影出来
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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)

[求助] Western blot不同标签蛋白同时被显影出来 已有2人参与

大家好，最近做western，两个蛋白相互作用，一个gst标签，一个是flag标签。在显影gst蛋白的时候，奇怪的是两种不同标签蛋白同时被显影出来，一抗二抗都换过，两种标签还是都能被显出来，大家帮忙分析下原因

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1楼 2017-03-07 00:06:13
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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)
5%牛奶block10分钟会影响么？

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2楼2017-03-07 00:43:53
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定没有抗体亚基的干扰吗？50 kDa和25 kDa。
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3楼2017-03-07 09:20:55
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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)
有一个flag标签蛋白是108kd，gst抗体结合后也可以看到，奇怪了

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4楼2017-03-07 09:42:02
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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-03-07 09:20:55
你确定没有抗体亚基的干扰吗？50 kDa和25 kDa。

有一个flag标签蛋白是108kd，gst抗体结合后也可以看到，应该不是抗体亚基

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5楼2017-03-07 09:43:02
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bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
曝光时间过长可以将全部蛋白都显影出来
抗体应该没有问题 优化一下实验方案 可以做个ELISA当做预实验
降低一抗浓度 适当降低二抗浓度 缩短显影曝光时间
摸索一下条件
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镂空的贝壳
6楼2017-03-07 09:46:09
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bush119

木虫 (职业作家)

灌水高手
多洗几次 5遍够了
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镂空的贝壳
7楼2017-03-07 09:46:37
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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by bush119 at 2017-03-07 09:46:09
曝光时间过长可以将全部蛋白都显影出来
抗体应该没有问题 优化一下实验方案 可以做个ELISA当做预实验
降低一抗浓度 适当降低二抗浓度 缩短显影曝光时间
摸索一下条件

谢谢！我试试～

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8楼2017-03-07 14:17:20
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镂空的贝壳

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by bush119 at 2017-03-07 09:46:37
多洗几次 5遍够了

好的，我试试看

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9楼2017-03-07 14:17:47
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柒柒柒柒哒

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
10楼2018-10-31 09:23:40
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