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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：原核表达实验
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15653823606

金虫 (小有名气)

Nevergiveup
引用回帖:
20楼: Originally posted by prthefu at 2017-03-09 17:06:29
去掉？那就不说自己的目的蛋白了啊，而且，我的跨膜结构域有六个，先关的氨基酸也不少呢。我的目的蛋白中间有六个跨膜结构，所以，去掉应该不太可能。...

我的也有4个跨膜区。跨膜蛋白在原核表达中挺难的。
你可以看下有关跨膜蛋白原核表达的文献。
看你要验证什么功能了。只用那一段序列去验证。
或者换种方法。
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21楼2017-03-09 19:54:24
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by prthefu at 2017-03-09 13:23:09
你好，想问一下，我重组菌测序正确做原核表达，可是做了多次，发现重组菌诱导、未诱导和空载组诱导，跑胶电泳条带都没有什么区别，不知道你能不能给我指点指点。谢谢...

你用的什么质粒？测序只测了一个单克隆吗？转化后多拿几个单克隆做诱导，再不表达就得从头做了

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22楼2017-03-09 20:35:23
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-09 20:35:23
你用的什么质粒？测序只测了一个单克隆吗？转化后多拿几个单克隆做诱导，再不表达就得从头做了
...

从头开始做，这么惨吗，我怕我时间来不及啊
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
23楼2017-03-09 21:04:54
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 15653823606 at 2017-03-09 19:54:24
我的也有4个跨膜区。跨膜蛋白在原核表达中挺难的。
你可以看下有关跨膜蛋白原核表达的文献。
看你要验证什么功能了。只用那一段序列去验证。
或者换种方法。...

验证蛋白功能是一个完整的蛋白分子，不会只是其中一段序列吧。如果真的表达不出来，换方法，那岂不是从头开始，时间还来得及吗
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
24楼2017-03-09 21:06:34
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