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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 求助大神：我想对已经筛好的抗体杂交瘤继续进行亚克隆，有些问题要请教
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princessliu

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神：我想对已经筛好的抗体杂交瘤继续进行亚克隆，有些问题要请教 已有2人参与

如题啊，我想对以前曾经筛好的抗体杂交瘤继续进行亚克隆，因为传代次数多了，用杂交瘤获得的抗体效价在降低。有人说需要重新对这株杂交瘤进行克隆化。不知道有没有大神这么做过？此过程中，我是否需要用HT培养基呢？是否需要饲养细胞呢？如果能筛好，是否还需要鉴定亚型呢？
好多问题……求大神解答~跪谢！
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1楼 2017-03-01 15:35:46
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
效价降低说明有的杂交瘤细胞已经丢失分泌抗体能力，需要重新做克隆化筛选，无需加HT，为了提高细胞活力建议加饲养细胞，对重新获得的克隆需要进行鉴定，选择效价高的进行扩大培养和保种，如果鉴定过程发现阳性率不高，则需要继续做亚克隆，阳性率达到100%时再进行保种，否则有较大转阴的风险。是否要鉴定亚型看自己需求。
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2楼2017-03-01 21:25:17
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princessliu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 314300420 at 2017-03-01 21:25:17
效价降低说明有的杂交瘤细胞已经丢失分泌抗体能力，需要重新做克隆化筛选，无需加HT，为了提高细胞活力建议加饲养细胞，对重新获得的克隆需要进行鉴定，选择效价高的进行扩大培养和保种，如果鉴定过程发现阳性率不高 ...

谢谢您的回复。饲养细胞的话就是选用从小鼠体内原代分离的小鼠腹腔巨噬细胞吗？培养基就用平时我培养此杂交瘤使用的培养基即可吗？
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3楼2017-03-02 11:44:50
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princessliu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 314300420 at 2017-03-01 21:25:17
效价降低说明有的杂交瘤细胞已经丢失分泌抗体能力，需要重新做克隆化筛选，无需加HT，为了提高细胞活力建议加饲养细胞，对重新获得的克隆需要进行鉴定，选择效价高的进行扩大培养和保种，如果鉴定过程发现阳性率不高 ...

还有哦，之前这个杂交瘤已经鉴定为IgG1亚型了，亚克隆之后亚型会有所变化吗？
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4楼2017-03-02 11:48:31
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by princessliu at 2017-03-02 11:48:31
还有哦，之前这个杂交瘤已经鉴定为IgG1亚型了，亚克隆之后亚型会有所变化吗？...

鉴定为阳性亚型是不会变的，亚克隆建议血清浓度提高

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5楼2017-03-02 12:19:04
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by princessliu at 2017-03-02 11:48:31
还有哦，之前这个杂交瘤已经鉴定为IgG1亚型了，亚克隆之后亚型会有所变化吗？...

准确说是亚类，是有可能变化的，因为IgG1并不是抗体恒定区基因重排的最终形式，该杂交瘤还可能再发生基因重排。
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6楼2017-03-05 09:54:48
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九生123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by princessliu at 2017-03-01 15:35:46
如题啊，我想对以前曾经筛好的抗体杂交瘤继续进行亚克隆，因为传代次数多了，用杂交瘤获得的抗体效价在降低。有人说需要重新对这株杂交瘤进行克隆化。不知道有没有大神这么做过？此过程中，我是否需要用HT培养基呢？ ...

可以试一下把这株细胞注射小鼠腹腔，然后再回收细胞。

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7楼2017-03-05 11:44:40
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