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princessliu

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神:我想对已经筛好的抗体杂交瘤继续进行亚克隆,有些问题要请教 已有2人参与

如题啊,我想对以前曾经筛好的抗体杂交瘤继续进行亚克隆,因为传代次数多了,用杂交瘤获得的抗体效价在降低。有人说需要重新对这株杂交瘤进行克隆化。不知道有没有大神这么做过?此过程中,我是否需要用HT培养基呢?是否需要饲养细胞呢?如果能筛好,是否还需要鉴定亚型呢?
好多问题……求大神解答~跪谢!
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
效价降低说明有的杂交瘤细胞已经丢失分泌抗体能力,需要重新做克隆化筛选,无需加HT,为了提高细胞活力建议加饲养细胞,对重新获得的克隆需要进行鉴定,选择效价高的进行扩大培养和保种,如果鉴定过程发现阳性率不高,则需要继续做亚克隆,阳性率达到100%时再进行保种,否则有较大转阴的风险。是否要鉴定亚型看自己需求。
2楼2017-03-01 21:25:17
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princessliu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 314300420 at 2017-03-01 21:25:17
效价降低说明有的杂交瘤细胞已经丢失分泌抗体能力,需要重新做克隆化筛选,无需加HT,为了提高细胞活力建议加饲养细胞,对重新获得的克隆需要进行鉴定,选择效价高的进行扩大培养和保种,如果鉴定过程发现阳性率不高 ...

谢谢您的回复。饲养细胞的话就是选用从小鼠体内原代分离的小鼠腹腔巨噬细胞吗?培养基就用平时我培养此杂交瘤使用的培养基即可吗?
3楼2017-03-02 11:44:50
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princessliu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 314300420 at 2017-03-01 21:25:17
效价降低说明有的杂交瘤细胞已经丢失分泌抗体能力,需要重新做克隆化筛选,无需加HT,为了提高细胞活力建议加饲养细胞,对重新获得的克隆需要进行鉴定,选择效价高的进行扩大培养和保种,如果鉴定过程发现阳性率不高 ...

还有哦,之前这个杂交瘤已经鉴定为IgG1亚型了,亚克隆之后亚型会有所变化吗?
4楼2017-03-02 11:48:31
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by princessliu at 2017-03-02 11:48:31
还有哦,之前这个杂交瘤已经鉴定为IgG1亚型了,亚克隆之后亚型会有所变化吗?...

鉴定为阳性亚型是不会变的,亚克隆建议血清浓度提高

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-03-02 12:19:04
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by princessliu at 2017-03-02 11:48:31
还有哦,之前这个杂交瘤已经鉴定为IgG1亚型了,亚克隆之后亚型会有所变化吗?...

准确说是亚类,是有可能变化的,因为IgG1并不是抗体恒定区基因重排的最终形式,该杂交瘤还可能再发生基因重排。
6楼2017-03-05 09:54:48
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九生123

新虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by princessliu at 2017-03-01 15:35:46
如题啊,我想对以前曾经筛好的抗体杂交瘤继续进行亚克隆,因为传代次数多了,用杂交瘤获得的抗体效价在降低。有人说需要重新对这株杂交瘤进行克隆化。不知道有没有大神这么做过?此过程中,我是否需要用HT培养基呢? ...

可以试一下把这株细胞注射小鼠腹腔,然后再回收细胞。

发自小木虫Android客户端
7楼2017-03-05 11:44:40
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