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提米

新虫 (初入文坛)

[求助] Tricine胶 跑的小蛋白 10kDa下面几乎就是花的 已有3人参与

求大神给个建议 左边三条带是细胞样品 可能当时提蛋白的时候降解了 右边三条带是组织样品。是20V预电泳20分钟,浓缩胶60v,分离胶140V跑的,跑到所有条带马上出去之前。做了两次都是这样

Tricine胶 跑的小蛋白 10kDa下面几乎就是花的


Tricine胶 跑的小蛋白 10kDa下面几乎就是花的-1


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wanshenghao

金虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

我也碰到过这个问题。一个蛋白只有5kd, 自己配的胶跑不出。 就想购买预制梯度胶跑跑看。 我购买的是万生昊天 EZBiolab的4-20%预制胶, 结果很不错。 现在我都懒得配胶了。 一天一块, 也花不了多少钱。
10楼2017-03-17 15:14:41
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提米

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 浮生若茶520 at 2017-03-02 10:50:42
楼主用的什么配方跑的啊

博士德那边建议用专门的tricine凝胶试剂盒 自己配难免有什么问题的。所以我刚买了索莱宝的试剂盒

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9楼2017-03-04 20:28:35
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普通回帖

十四_14

荣誉版主 (正式写手)

我也是这样  简直愁死了

顺便问一下楼主制胶配方?
2楼2017-02-28 13:02:24
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提米

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-02-28 13:02:24
我也是这样  简直愁死了

顺便问一下楼主制胶配方?

文件现在不在手边  下午发给你

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3楼2017-02-28 13:03:21
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浮生若茶520

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主用的什么配方跑的啊
4楼2017-03-02 10:50:42
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寥落星晨

木虫 (小有名气)

跑花了很可能说明你的胶板有问题、看你的Marker跑的有点歪、如果跑的时候胶板里有气泡、电流不均、就是这样。你做胶的时候、在加aps和temed的之前可做抽空气处理?分离胶浓度多少、超过12%的分离胶凝固很快、而且放热特别容易造成出现胶板不均匀、这种要低温下使胶板慢慢凝固?在看你的样品最下的条带花了、我觉得你的两块玻璃板漏液、最好先检查一下这个问题。

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5楼2017-03-02 19:06:54
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寥落星晨

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 浮生若茶520 at 2017-03-02 10:50:42
楼主用的什么配方跑的啊

Tricine的作用与Glycine的相似.那种配方中,用Tricine代替Glycine,还得加Tris.这个是用于小分子蛋白电泳的.配起来有些麻烦.反正都是sds-page.

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6楼2017-03-02 19:09:17
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释然Ooo

新虫 (小有名气)

建议在配方中加入尿素或者甘油,可以减小胶的孔径从而利于分离小分子蛋白。同时要在冰上跑,防止小分子蛋白降解。

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7楼2017-03-02 21:18:17
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浮生若茶520

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 寥落星晨 at 2017-03-02 19:09:17
Tricine的作用与Glycine的相似.那种配方中,用Tricine代替Glycine,还得加Tris.这个是用于小分子蛋白电泳的.配起来有些麻烦.反正都是sds-page.
...

能发我一份你的配方吗
8楼2017-03-03 11:05:26
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