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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧

[求助] 求助:p21蛋白发光不出条带

最近做WB,p21蛋白(21kd)发光不出来,以往机器反应几十秒就能出来,可是最近几次机器反应好几分钟才出来,结果也没有条带,只是一片黑。293细胞,提的蛋白质浓度2点几,第一次上样10ul,以为是量少了,又做了一次上20ul,结果还是如此。新买的abcom抗体,很贵。真的不知道该往哪里找原因了,各位大神有了解的还望不吝赐教,多谢!

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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧

2楼2017-02-27 16:38:05
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北国佳人

铜虫 (小有名气)

你可以这样再尝试下 :
配制蛋白胶时,把分离胶浓度提高例如如你平时用10%,你可配15%尝试下。,,把蛋白带压缩出来,
膜曝光成黑了,说明曝光时间太久,要缩短时间
努力的小蜜蜂
3楼2017-02-27 18:01:48
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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧

引用回帖:
3楼: Originally posted by 北国佳人 at 2017-02-27 18:01:48
你可以这样再尝试下 :
配制蛋白胶时,把分离胶浓度提高例如如你平时用10%,你可配15%尝试下。,,把蛋白带压缩出来,
膜曝光成黑了,说明曝光时间太久,要缩短时间

多谢,不过我在10%的胶上跑的有15kd的蛋白很正常,所以应该和胶浓度关系不是太大吧?

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4楼2017-02-28 08:23:53
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北国佳人

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 五羊齐天 at 2017-02-28 08:23:53
多谢,不过我在10%的胶上跑的有15kd的蛋白很正常,所以应该和胶浓度关系不是太大吧?
...

你这个实验现象还可能与含量低有关
努力的小蜜蜂
5楼2017-02-28 16:10:26
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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧

引用回帖:
5楼: Originally posted by 北国佳人 at 2017-02-28 16:10:26
你这个实验现象还可能与含量低有关...

好的,下次换大细胞瓶,提的蛋白质浓度高一些!
6楼2017-02-28 17:10:14
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