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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求助：p21蛋白发光不出条带
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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧

[求助] 求助：p21蛋白发光不出条带

最近做WB，p21蛋白（21kd）发光不出来，以往机器反应几十秒就能出来，可是最近几次机器反应好几分钟才出来，结果也没有条带，只是一片黑。293细胞，提的蛋白质浓度2点几，第一次上样10ul，以为是量少了，又做了一次上20ul，结果还是如此。新买的abcom抗体，很贵。真的不知道该往哪里找原因了，各位大神有了解的还望不吝赐教，多谢！

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1楼 2017-02-27 16:36:34
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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧
如图
求助：p21蛋白发光不出条带



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2楼2017-02-27 16:38:05
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北国佳人

铜虫 (小有名气)
你可以这样再尝试下 ：
配制蛋白胶时，把分离胶浓度提高例如如你平时用10%，你可配15%尝试下。，，把蛋白带压缩出来，
膜曝光成黑了，说明曝光时间太久，要缩短时间
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努力的小蜜蜂
3楼2017-02-27 18:01:48
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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧
引用回帖:
3楼: Originally posted by 北国佳人 at 2017-02-27 18:01:48
你可以这样再尝试下 ：
配制蛋白胶时，把分离胶浓度提高例如如你平时用10%，你可配15%尝试下。，，把蛋白带压缩出来，
膜曝光成黑了，说明曝光时间太久，要缩短时间

多谢，不过我在10%的胶上跑的有15kd的蛋白很正常，所以应该和胶浓度关系不是太大吧？

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4楼2017-02-28 08:23:53
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北国佳人

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 五羊齐天 at 2017-02-28 08:23:53
多谢，不过我在10%的胶上跑的有15kd的蛋白很正常，所以应该和胶浓度关系不是太大吧？
...

你这个实验现象还可能与含量低有关
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努力的小蜜蜂
5楼2017-02-28 16:10:26
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五羊齐天

金虫 (小有名气)

研究僧
引用回帖:
5楼: Originally posted by 北国佳人 at 2017-02-28 16:10:26
你这个实验现象还可能与含量低有关...

好的，下次换大细胞瓶，提的蛋白质浓度高一些！
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6楼2017-02-28 17:10:14
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