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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 重组质粒验证出的问题!

我刚构建好的表达载体用双酶切可以切出目的条带(1.1kb左右)和载体,效果很好;,然后想通过PCR再验证一次,这个时候怪事出现了,PCR产物有两条,一个为1;1kb左右的条带很淡;另一个为2kb左右的条带很亮,我怀疑我的反应体系有问题,改变条件重做了两次还是出现同样的问题。大家有没有出现过,怎么解释。谢谢!
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霉菌
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yasmine

银虫 (正式写手)

直接将该质粒交公司测序,是最快的方法吧

[ Last edited by yasmine on 2008-12-21 at 10:03 ]
想到达明天,今天就要起飞
2楼2008-12-20 21:04:06
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快乐常在

金虫 (小有名气)

我想问下,你重新设计过引物吗?
3楼2008-12-20 21:23:05
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快乐常在

金虫 (小有名气)

我想问下,你重新设计过引五做吗?后面的结果还是那样吗?
4楼2008-12-20 21:26:00
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
回收酶切的目的片断 再PCR试试
细推物理须行乐。
5楼2008-12-20 22:55:01
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
在提质粒的时候顺便提两管空质粒,看你的重组有抬高没有,有抬高的基本就确定是重组成功了,我这样做过十几次了,还没有出错过。PCR验证常出错的,基本上是不可信的,测序结果是最准确的
6楼2008-12-21 14:29:08
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cynjau

金虫 (小有名气)

以酶切为主,PCR很不准确的
我也遇到过的
7楼2008-12-21 15:09:18
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