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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 重组质粒验证出的问题！
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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 重组质粒验证出的问题！

我刚构建好的表达载体用双酶切可以切出目的条带（1.1kb左右）和载体，效果很好；，然后想通过PCR再验证一次，这个时候怪事出现了，PCR产物有两条，一个为1；1kb左右的条带很淡；另一个为2kb左右的条带很亮，我怀疑我的反应体系有问题，改变条件重做了两次还是出现同样的问题。大家有没有出现过，怎么解释。谢谢！
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霉菌
1楼 2008-12-20 20:38:47
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yasmine

银虫 (正式写手)
直接将该质粒交公司测序，是最快的方法吧

[ Last edited by yasmine on 2008-12-21 at 10:03 ]
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想到达明天，今天就要起飞
2楼2008-12-20 21:04:06
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快乐常在

金虫 (小有名气)
我想问下，你重新设计过引物吗？
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3楼2008-12-20 21:23:05
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快乐常在

金虫 (小有名气)
我想问下，你重新设计过引五做吗？后面的结果还是那样吗？
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4楼2008-12-20 21:26:00
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lauren180

木虫 (著名写手)

小木虫挖井人
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
回收酶切的目的片断 再PCR试试
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细推物理须行乐。
5楼2008-12-20 22:55:01
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
在提质粒的时候顺便提两管空质粒，看你的重组有抬高没有，有抬高的基本就确定是重组成功了，我这样做过十几次了，还没有出错过。PCR验证常出错的，基本上是不可信的，测序结果是最准确的
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6楼2008-12-21 14:29:08
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cynjau

金虫 (小有名气)
以酶切为主，PCR很不准确的
我也遇到过的
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7楼2008-12-21 15:09:18
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