| 查看: 583 | 回复: 4 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
酶切、连接、转化再次求助
|
|||
|
前次问过大家。这次有些更具体的问题。 （1）酶切的时候，一般vector和PCR产物分别加入多少ng？ （2）酶切的时间一般是多长？37°过夜会不会不好？ （3）连接反应，我计划加入300ng DNA和100 ng vector，是否足够？ （4）如果我的连接如上，转化的时候，应该加入多少的总DNA？ 谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。
已经有5人回复
-
324求调剂
已经有8人回复
-
284求调剂
已经有12人回复
-
348求调剂
已经有3人回复
-
329求调剂
已经有7人回复
-
求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕
已经有4人回复
-
考研调剂
已经有9人回复
-
304材料求调剂
已经有4人回复
-
一志愿郑大085600，310分求调剂
已经有3人回复
-
317求调剂
已经有7人回复
figo.339
木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 12859.3
- 散金: 400
- 帖子: 1529
- 在线: 163.5小时
- 虫号: 467945
- 注册: 2007-11-27
- 性别: GG
- 专业: 高分子合成化学
3楼2008-12-20 09:26:28
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
★ ★
forget1997(金币+2,VIP+0):三磷酸腺苷 是克隆专家啊！
forget1997(金币+2,VIP+0):三磷酸腺苷 是克隆专家啊！
|
（1）酶切的时候，一般vector和PCR产物分别加入多少ng？------越多越好。当然不要超过酶的消化能力，不超过1~2ug。 （2）酶切的时间一般是多长？37°过夜会不会不好？--------NEB一到两个单位的酶1h以内可以消化1~2ug DNA。看酶切体系。过夜不好，星号活性。 （3）连接反应，我计划加入300ng DNA和100 ng vector，是否足够？----------看摩尔比而不是质量比，Vector：Insert=1：3~10。我喜欢1：5 （4）如果我的连接如上，转化的时候，应该加入多少的总DNA？--------连接体系一般也就10ul~20ul。一般就直接丢10ul进去了。fmol级别的都能有克隆出现，主要看转化效率。 |
2楼2008-12-20 09:22:49
charon1982
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 5106.2
- 散金: 350
- 红花: 12
- 帖子: 1250
- 在线: 469.8小时
- 虫号: 224872
- 注册: 2006-03-22
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
4楼2008-12-20 12:24:35
zhijiangli
金虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1262.2
- 散金: 683
- 红花: 1
- 帖子: 812
- 在线: 196.4小时
- 虫号: 283726
- 注册: 2006-10-08
- 性别: GG
- 专业: 作物杂种优势及其利用
5楼2008-12-22 12:10:35
