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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 有没有在做荧光原位杂交的大侠啊
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DL_nvwu

铜虫 (小有名气)

[交流] 有没有在做荧光原位杂交的大侠啊 已有7人参与

请问有没有人做过组织荧光原位杂交？初次接触此项技术，甚是迷惑，还望大家出手相救
问题：
1.制备探针添加荧光素的时候怎么选择？
2.想进行多色荧光原位杂交荧光素怎么选？
3.是不是需要和自己实验室的设备相匹配？我们的激光共聚焦配有555nm和488nm的激发光过滤器
求各位大神相助
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欢迎学术交流，共同进步
1楼 2017-02-22 20:23:17
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Lambert0407

新虫 (初入文坛)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-15 09:17:27
我也在做FISH,
1.荧光素要在探针的5’或者3’端标记。
2.每个荧光素都用各自的excitation & emission，必须与荧光显微镜的过滤器的波长匹配才可见。
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2楼2017-03-11 19:22:49
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咱小凉

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼上两个可以加个好友平时交流吗？我也准备马上做FISH

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3楼2017-03-14 23:57:00
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咱小凉

新虫 (初入文坛)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-15 09:17:43
引用回帖:
2楼: Originally posted by Lambert0407 at 2017-03-11 19:22:49
我也在做FISH,
1.荧光素要在探针的5’或者3’端标记。
2.每个荧光素都用各自的excitation & emission，必须与荧光显微镜的过滤器的波长匹配才可见。

你知道荧光显微镜或者激光共聚焦的话最后该怎么计数呢文献都没有具体说明，只是说随机选取15个视野，然后利用稀释倍数统计学方法计算原样品中细胞的总数。也没查到具体公式

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4楼2017-03-14 23:59:18
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小小竹叶

新虫 (正式写手)
★
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我也在做，迷茫，现在还在做染色体制片

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5楼2017-09-26 15:50:48
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大头妞妞

新虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 咱小凉 at 2017-03-14 23:57:00
楼上两个可以加个好友平时交流吗？我也准备马上做FISH

可以加你QQ吗，前辈，我现在开始做，想跟你们交流一下，我做的DNA探针组织杂交的
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6楼2017-11-17 14:54:53
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karisq33

铜虫 (小有名气)
我做的FISH是两个探针一起做的，一个探针带了荧光素标记，一个是Dig标记，Dig标记基因能做出来，但是荧光素标记的探针怎么都做不出来，有时候20个胚胎会有1个做出来，而且信号很弱，求大神指点啊，我做了两个月了，泪崩…

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7楼2018-02-28 23:33:29
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ziyie

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by karisq33 at 2018-02-28 23:33:29
我做的FISH是两个探针一起做的，一个探针带了荧光素标记，一个是Dig标记，Dig标记基因能做出来，但是荧光素标记的探针怎么都做不出来，有时候20个胚胎会有1个做出来，而且信号很弱，求大神指点啊，我做了两个月了， ...

我也是用荧光素标记，做了很久也没有结果，最好的结果是杂交到细胞核上，没有杂到染色体上

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8楼2018-04-30 10:32:59
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刘鹏飞

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
8楼: Originally posted by ziyie at 2018-04-30 10:32:59
我也是用荧光素标记，做了很久也没有结果，最好的结果是杂交到细胞核上，没有杂到染色体上
...

我现在也在做生物素标记，缺口平移法制备探针，不知道和你是否相同，能否加个好友一块讨论下

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9楼2018-05-25 02:09:10
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