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blizzard1506

[交流] RNA试验枪头离心管等的处理问题

做RNA 实验时要对所用的枪头离心管等处理,去除RNAase,大家都是怎么做得,常用的是用0.1%DEPC水浸泡过夜,再高压灭菌。
我想问的是
      1:0.1%DEPC水,是不是在1000ml蒸馏水中加入1mlDEPC,摇匀,接着就可以用来浸泡枪头离心管啊,怎么有的说加入1mlDEPC后放置4小时再用啊,放了那么久还有用吗,那不就分解了,效力不是降低了吗?
      2:枪头离心管浸泡过夜后高压灭菌多长时间啊?我灭了20min,可是还有味道啊,会不会还有残留的DEPC啊,这样对下一步的试验有影响啊,还有0.1%DEPC水灭菌问题,我灭了两次,20min一次的,可是还有DEPC的味道,怎么才叫彻底除去DEPC啊?有的说闻不到味道就好了,可是我灭了两次还有味道,不知我这样灭菌对我下步的试验有无影响。
      3:提RNA时用到的75%的乙醇,要怎么配制啊,才能保证无RNAase,主要是这25%的水要怎么量取,是不是要找个DEPC处理过得量筒啥的,来量啊?还有装试剂的瓶子怎么处理,我们实验室的的试剂瓶是那种瓶口有一圈塑料的广口的螺口瓶,这种瓶子可不能放到烘箱里180度烘四小时啊,是不是可以这样,瓶子洗干净之后装满0.1%DEPC水过夜,灭菌就好了。

希望大家能提供自己做RNA试验时,在如何去除RNAase、如何处理枪头离心管、试剂配制等方面的具体方法,不要网上的那种陈词老调,希望的是自己的经验总结。谢谢
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1)DEPC处理过夜就可以了,处理过程中降解也没有关系,因为没有新的RNase进入啊。
2)DEPC高压处理后,就降解成乙醇了,你闻到的味道可能是乙醇的味道。再说枪头和EP管多灭几次菌,对下面的实验会有什么影响呢?
3)75%的乙醇,不需要很精确定量,所以用DEPC处理过的枪头移取DEPC水和未开封的酒精,在EP管里配制即可。
4)蓝盖瓶,玻璃部分干热灭菌是没有关系的,但是盖子呢?所以,瓶子洗干净之后装满0.1%DEPC水过夜,灭菌就好了。

我觉得trizol比那些试剂盒好多了,自己能知道自己在干啥,再说那些试剂盒死贵!
2楼2008-12-19 23:13:26
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对了,我记得有个试剂叫RNase rose可以用来处理一下不能用DEPC-灭菌的东西,比如某些移液枪,泡泡就好了。

选择无风的环境很重要,取ep管什么的,用镊子拿,镊子常一直在火上烧着。基本上就没什么事情了,祝你成功!
3楼2008-12-19 23:17:16
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