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blizzard1506

应助: (幼儿园)
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[交流] RNA试验枪头离心管等的处理问题

做RNA 实验时要对所用的枪头离心管等处理，去除RNAase，大家都是怎么做得，常用的是用0.1%DEPC水浸泡过夜，再高压灭菌。
我想问的是
   1：0.1%DEPC水，是不是在1000ml蒸馏水中加入1mlDEPC，摇匀，接着就可以用来浸泡枪头离心管啊，怎么有的说加入1mlDEPC后放置4小时再用啊，放了那么久还有用吗，那不就分解了，效力不是降低了吗？
   2：枪头离心管浸泡过夜后高压灭菌多长时间啊？我灭了20min，可是还有味道啊，会不会还有残留的DEPC啊，这样对下一步的试验有影响啊，还有0.1%DEPC水灭菌问题，我灭了两次，20min一次的，可是还有DEPC的味道，怎么才叫彻底除去DEPC啊？有的说闻不到味道就好了，可是我灭了两次还有味道，不知我这样灭菌对我下步的试验有无影响。
   3：提RNA时用到的75%的乙醇，要怎么配制啊，才能保证无RNAase，主要是这25%的水要怎么量取，是不是要找个DEPC处理过得量筒啥的，来量啊?还有装试剂的瓶子怎么处理，我们实验室的的试剂瓶是那种瓶口有一圈塑料的广口的螺口瓶，这种瓶子可不能放到烘箱里180度烘四小时啊，是不是可以这样，瓶子洗干净之后装满0.1%DEPC水过夜，灭菌就好了。

希望大家能提供自己做RNA试验时，在如何去除RNAase、如何处理枪头离心管、试剂配制等方面的具体方法，不要网上的那种陈词老调，希望的是自己的经验总结。谢谢

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1楼 2008-12-19 21:09:21

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应助: (幼儿园)
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虫号: 382916

1）DEPC处理过夜就可以了，处理过程中降解也没有关系，因为没有新的RNase进入啊。
2）DEPC高压处理后，就降解成乙醇了，你闻到的味道可能是乙醇的味道。再说枪头和EP管多灭几次菌，对下面的实验会有什么影响呢？
3）75%的乙醇，不需要很精确定量，所以用DEPC处理过的枪头移取DEPC水和未开封的酒精，在EP管里配制即可。
4）蓝盖瓶，玻璃部分干热灭菌是没有关系的，但是盖子呢？所以，瓶子洗干净之后装满0.1%DEPC水过夜，灭菌就好了。

我觉得trizol比那些试剂盒好多了，自己能知道自己在干啥，再说那些试剂盒死贵！