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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » cDNA文库构建中的问题
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blizzard1506

[交流] cDNA文库构建中的问题

有没有人在用或是用过的clontech的Creator™ SMART™ cDNA Library Construction Kit 。在做得过程中有什么特别要注意的地方啊？

1：这个试剂盒不提供反转录酶，大家用得是哪个公司的酶，还是用clontech推荐的MMLV Reverse Transcriptase，这个酶要多少钱？
2：在合成第一链时RNA的用量是不是按试剂说明的量添加，不用加大量吗？
3：合成第一链时的保温实在PCR仪中做还是水浴锅中？所用的离心管，枪头用0.1%depc水浸泡过夜，高压灭菌就好了是吧（121度、20min），好像灭好了还有味道啊，是不是灭的不彻底啊，会不会对试验有影响啊。

总之就是，如何做才能构建高质量的cDNA文库。
谢谢您的回答
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1楼 2008-12-19 21:06:48
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
1. Invitrogen 的 Reverse Transcriptase 不错；
2. 想加大量可以多做几管啊；
3. 在哪保温都可以。离心管、枪头最好订购专用做RNA的。
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
3楼2008-12-20 16:54:52
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黑皮猩猩

铜虫 (初入文坛)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
以前听师兄提过smart库的相关的知识
smart库应该不用很多RNA的，25ng的mRNA或者50ng的Total RNA就足以了
我们建库时，都是用的PCR仪保温，不过对PCR仪不太好
有味道？呵呵，是不是DEPC水的味道？如果是应该没影响的
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2楼2008-12-20 03:27:47
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daydayup2005

银虫 (小有名气)
正好也要做这个,学习学习了
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4楼2008-12-20 21:05:52
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yz123789

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也想做这个，还没确定用哪个KIT呢，烦
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6楼2009-09-01 20:21:53
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