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blizzard1506

[交流] cDNA文库构建中的问题

有没有人在用或是用过的clontech的Creator™ SMART™ cDNA Library Construction Kit 。在做得过程中有什么特别要注意的地方啊?

1:这个试剂盒不提供反转录酶,大家用得是哪个公司的酶,还是用clontech推荐的MMLV Reverse Transcriptase,这个酶要多少钱?
2:在合成第一链时RNA的用量是不是按试剂说明的量添加,不用加大量吗?
3:合成第一链时的保温实在PCR仪中做还是水浴锅中?所用的离心管,枪头用0.1%depc水浸泡过夜,高压灭菌就好了是吧(121度、20min),好像灭好了还有味道啊,是不是灭的不彻底啊,会不会对试验有影响啊。

总之就是,如何做才能构建高质量的cDNA文库。
谢谢您的回答
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
1. Invitrogen 的 Reverse Transcriptase 不错;
2. 想加大量可以多做几管啊;
3. 在哪保温都可以。离心管、枪头最好订购专用做RNA的。
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
3楼2008-12-20 16:54:52
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黑皮猩猩

铜虫 (初入文坛)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
以前听师兄提过smart库的相关的知识
smart库应该不用很多RNA的,25ng的mRNA或者50ng的Total RNA就足以了
我们建库时,都是用的PCR仪保温,不过对PCR仪不太好
有味道?呵呵,是不是DEPC水的味道?如果是应该没影响的
2楼2008-12-20 03:27:47
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daydayup2005

银虫 (小有名气)

正好也要做这个,学习学习了
4楼2008-12-20 21:05:52
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yz123789

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也想做这个,还没确定用哪个KIT呢,烦
6楼2009-09-01 20:21:53
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