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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫实验 » 用流式测粒细胞抗原，应该选哪种白细胞裂解液
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evasong

铜虫 (小有名气)

[交流] 用流式测粒细胞抗原，应该选哪种白细胞裂解液 已有2人参与

求教各位专家！我想用流式检测人粒细胞表面抗原，打算用percoll法提取中性粒，然后裂解粒细胞，再用流式检测细胞碎片上的抗原蛋白。因此细胞碎片应该尽可能小，请问应该用那种白细胞裂解液？

谢谢！
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1楼 2017-02-22 15:19:27
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keke226

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3楼: Originally posted by evasong at 2017-02-23 09:37:32
谢谢您的回复。因为细胞生存期短，我想把细胞裂解后保存，然后用BCA磁珠法检测细胞膜碎片上的抗原。请问您有什么好建议吗？...

磁珠我也没用过。我们以前用流式测表面抗原。不能马上检测的话，会向细胞中加固定液，放在在4度保存两三天再测也可以。

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读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
4楼2017-02-23 12:34:16
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keke226

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5楼: Originally posted by evasong at 2017-02-24 07:50:42
我也打算直接用流式测细胞了，请问您加的什么固定液？有没有考虑过低温冷冻保存久一些再测？...

我们用的是1%的多聚甲醛，使细胞膜固化。冷冻没试过。

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evasong
读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
6楼2017-02-24 11:14:41
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keke226

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8楼: Originally posted by evasong at 2017-02-27 09:25:35
嗯嗯，谢谢！请问可不可以告诉我固化的具体方法？...

我们是先按正常步骤标记上荧光抗体。然后用比如200微升的PBS重悬细胞。我们的固定液都是配3%的母液(4度避光保存的)。再向200微升的样品中加入100微升的3%多聚甲醛混匀，放在4度避光保存就行了。

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9楼2017-02-27 10:47:16
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keke226

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10楼: Originally posted by evasong at 2017-02-28 07:54:19
请问一定要先标记荧光抗体再固化吗？可不可以固化后保存一段时间再连接荧光抗体？...

也可以先固定再标记的

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11楼2017-02-28 09:25:45
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keke226

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检测细胞表面抗原不需要裂解细胞吧。直接用抗体标记不就行了？

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2楼2017-02-22 17:21:45
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evasong

铜虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by keke226 at 2017-02-22 17:21:45
检测细胞表面抗原不需要裂解细胞吧。直接用抗体标记不就行了？

谢谢您的回复。因为细胞生存期短，我想把细胞裂解后保存，然后用BCA磁珠法检测细胞膜碎片上的抗原。请问您有什么好建议吗？
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3楼2017-02-23 09:37:32
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evasong

铜虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by keke226 at 2017-02-23 12:34:16
磁珠我也没用过。我们以前用流式测表面抗原。不能马上检测的话，会向细胞中加固定液，放在在4度保存两三天再测也可以。
...

我也打算直接用流式测细胞了，请问您加的什么固定液？有没有考虑过低温冷冻保存久一些再测？
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5楼2017-02-24 07:50:42
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keke226

铁杆木虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by evasong at 2017-02-24 07:50:42
我也打算直接用流式测细胞了，请问您加的什么固定液？有没有考虑过低温冷冻保存久一些再测？...

我们用的是1%的多聚甲醛，使细胞膜固化。冷冻没试过。

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7楼2017-02-24 11:15:36
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evasong

铜虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by keke226 at 2017-02-24 11:14:41
我们用的是1%的多聚甲醛，使细胞膜固化。冷冻没试过。
...

嗯嗯，谢谢！请问可不可以告诉我固化的具体方法？
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8楼2017-02-27 09:25:35
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evasong

铜虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by keke226 at 2017-02-27 10:47:16
我们是先按正常步骤标记上荧光抗体。然后用比如200微升的PBS重悬细胞。我们的固定液都是配3%的母液(4度避光保存的)。再向200微升的样品中加入100微升的3%多聚甲醛混匀，放在4度避光保存就行了。
...

请问一定要先标记荧光抗体再固化吗？可不可以固化后保存一段时间再连接荧光抗体？
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10楼2017-02-28 07:54:19
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