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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 同一蛋白在HPLC测的纯度>99%，而UPLC上出现峰裂分
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一品哥哥
:-O

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11楼2017-02-22 07:21:00
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by superyeast at 2017-02-21 22:52:13
HPLC的柱子是什么型号的

Symmetry300 C4 5um 4.6*250mm
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12楼2017-02-22 07:58:41
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)
上LC-MASS确认一下吧，感觉像两个物质
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快乐不需要走遍天涯去寻找，只需播一粒种子在脚下。
13楼2017-02-22 12:25:18
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llw1986

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by huangts123 at 2017-02-21 17:30:35
1、如图中流动相所示，A:55%→40%; B:45%→60%;检查过没有放反； 2、如果样品浓度低，进样量大（10ul）会不会导致峰裂分； 3、样品为制剂液（主要为注射用水），怎样才能用流动相来溶(ps:用流动相稀释？ 蛋白质在还 ...

A相和B相是你的流动相，我说的强洗和弱洗是指UPLC的两个灌洗液
样品浓度0.81mg/mL已经很高了啊，UPLC灵敏度也很高的
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14楼2017-02-22 16:46:06
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by llw1986 at 2017-02-22 16:46:06
A相和B相是你的流动相，我说的强洗和弱洗是指UPLC的两个灌洗液
样品浓度0.81mg/mL已经很高了啊，UPLC灵敏度也很高的...

您好，UPLC是借用别人的仪器（仪器上本来连有好多管子），我也是刚接触UPLC，只换了流动相，其他没有动过。请问灌洗液一般是什么溶剂？强洗和弱洗的管子上有什么标识？谢谢
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15楼2017-02-22 18:08:13
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llw1986

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by huangts123 at 2017-02-22 18:08:13
您好，UPLC是借用别人的仪器（仪器上本来连有好多管子），我也是刚接触UPLC，只换了流动相，其他没有动过。请问灌洗液一般是什么溶剂？强洗和弱洗的管子上有什么标识？谢谢...

我不知道你们的仪器强洗和弱洗用的什么，一般都是乙腈和水。管子上应该是S和W吧，具体我也忘记啦
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16楼2017-02-23 17:12:00
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by llw1986 at 2017-02-21 17:09:38
1. 你的强洗和弱洗用的什么？有没有放反了？
2. 如果怀疑过载了 这个是最好解决的，可以做几个稀释样品试一下就知道了，分别稀释10， 100， 1000等。直至不出现分叉
3. 溶剂效应的话可以用其实流动相组成来溶解样 ...

您好，如图所示，我通过减少进样量，稀释样品浓度，用流动相稀释样品，UPLC还是出双峰。好难过，难道是方法有问题？
同一蛋白在HPLC测的纯度>99%，而UPLC上出现峰裂分
UPLC.jpg
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17楼2017-03-01 16:27:32
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llw1986

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by huangts123 at 2017-03-01 16:27:32
您好，如图所示，我通过减少进样量，稀释样品浓度，用流动相稀释样品，UPLC还是出双峰。好难过，难道是方法有问题？

UPLC.jpg
...

这么看感觉应该是两个物质 你打个质谱看看
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18楼2017-03-01 17:06:24
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by llw1986 at 2017-03-01 17:06:24
这么看感觉应该是两个物质 你打个质谱看看...

这个是蛋白质，分子量是一个范围，和化药不一样啊
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19楼2017-03-01 17:15:27
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llw1986

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by huangts123 at 2017-03-01 17:15:27
这个是蛋白质，分子量是一个范围，和化药不一样啊...

这就尴尬了 光看你图忘记你做的是蛋白了，突然想起个问题 你UPLC和HPLC用的是同一根柱子吗？
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20楼2017-03-01 17:25:47
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