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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 同一蛋白在HPLC测的纯度>99%，而UPLC上出现峰裂分
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 同一蛋白在HPLC测的纯度>99%，而UPLC上出现峰裂分 已有1人参与

各位大神，下图是一个分子量约为80kD的蛋白，HPLC上检测的纯度为99.40%，峰型正常；UPLC上为什么会裂分? ①进样量为10ul，浓度约为0.81mg/ml，样品过载？ ②蛋白是用注射用水溶的，会是溶样的溶剂效应导致的？③还是因为蛋白本身的原因！请各位大神多多指教，谢谢！

同一蛋白在HPLC测的纯度>99%，而UPLC上出现峰裂分
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1楼 2017-02-21 15:26:54
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by llw1986 at 2017-02-21 17:09:38
1. 你的强洗和弱洗用的什么？有没有放反了？
2. 如果怀疑过载了 这个是最好解决的，可以做几个稀释样品试一下就知道了，分别稀释10， 100， 1000等。直至不出现分叉
3. 溶剂效应的话可以用其实流动相组成来溶解样 ...

1、如图中流动相所示，A:55%→40%; B:45%→60%;检查过没有放反； 2、如果样品浓度低，进样量大（10ul）会不会导致峰裂分； 3、样品为制剂液（主要为注射用水），怎样才能用流动相来溶(ps:用流动相稀释？ 蛋白质在还有乙腈的流动相中会不会变性)
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5楼2017-02-21 17:30:35
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llx5262187

禁虫 (小有名气)
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2楼2017-02-21 16:06:20
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llw1986

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
huangts123: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-02-21 18:33:10
1. 你的强洗和弱洗用的什么？有没有放反了？
2. 如果怀疑过载了 这个是最好解决的，可以做几个稀释样品试一下就知道了，分别稀释10， 100， 1000等。直至不出现分叉
3. 溶剂效应的话可以用其实流动相组成来溶解样品
本身原因应该不太可能 毕竟你咋HPLC上出的峰没有分叉，当然不同仪器间出现差异也是可以理解的
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3楼2017-02-21 17:09:38
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by llx5262187 at 2017-02-21 16:06:20
过载的可能性最大，这个色谱柱一般进样量在2ul以下，浓度也不应该这么高。建议你稀释10倍，然后进样量降低。

如图所示，上图是UPLC流速为0.2ml/min的峰（同一样品），下图是发酵液（含有此蛋白质，浓度较低）流速为0.2ml/min的峰，下图的峰是不是可以看出此样品中浓度较低，但由于进样量大导致的？
同一蛋白在HPLC测的纯度>99%，而UPLC上出现峰裂分-1
oo.png
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4楼2017-02-21 17:24:12
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