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huangts123

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 同一蛋白在HPLC测的纯度>99%,而UPLC上出现峰裂分 已有1人参与

各位大神,下图是一个分子量约为80kD的蛋白,HPLC上检测的纯度为99.40%,峰型正常;UPLC上为什么会裂分? ①进样量为10ul,浓度约为0.81mg/ml,样品过载? ②蛋白是用注射用水溶的,会是溶样的溶剂效应导致的?③还是因为蛋白本身的原因!请各位大神多多指教,谢谢!

同一蛋白在HPLC测的纯度>99%,而UPLC上出现峰裂分
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
24楼: Originally posted by llw1986 at 2017-03-02 13:04:11
应该不会是不同的亚型吧,不同的亚型应该分不开的...

请问有哪些方法可以确定这两个峰中有一个为杂质或为两个不同亚型?(PS:LC-MS可行么?有没有相关文献,谢谢)
25楼2017-03-02 14:55:32
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llx5262187

禁虫 (小有名气)

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2楼2017-02-21 16:06:20
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llw1986

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
huangts123: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-02-21 18:33:10
1. 你的强洗和弱洗用的什么?有没有放反了?
2. 如果怀疑过载了 这个是最好解决的,可以做几个稀释样品试一下就知道了,分别稀释10, 100, 1000等。直至不出现分叉
3. 溶剂效应的话可以用其实流动相组成来溶解样品
本身原因应该不太可能 毕竟你咋HPLC上出的峰没有分叉,当然不同仪器间出现差异也是可以理解的
3楼2017-02-21 17:09:38
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by llx5262187 at 2017-02-21 16:06:20
过载的可能性最大,这个色谱柱一般进样量在2ul以下,浓度也不应该这么高。建议你稀释10倍,然后进样量降低。

如图所示,上图是UPLC流速为0.2ml/min的峰(同一样品),下图是发酵液(含有此蛋白质,浓度较低)流速为0.2ml/min的峰,下图的峰是不是可以看出此样品中浓度较低,但由于进样量大导致的?
同一蛋白在HPLC测的纯度>99%,而UPLC上出现峰裂分-1
oo.png

4楼2017-02-21 17:24:12
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