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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 同一蛋白在HPLC测的纯度>99%，而UPLC上出现峰裂分
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 同一蛋白在HPLC测的纯度>99%，而UPLC上出现峰裂分 已有1人参与

各位大神，下图是一个分子量约为80kD的蛋白，HPLC上检测的纯度为99.40%，峰型正常；UPLC上为什么会裂分? ①进样量为10ul，浓度约为0.81mg/ml，样品过载？ ②蛋白是用注射用水溶的，会是溶样的溶剂效应导致的？③还是因为蛋白本身的原因！请各位大神多多指教，谢谢！

同一蛋白在HPLC测的纯度>99%，而UPLC上出现峰裂分
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1楼 2017-02-21 15:26:54
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llw1986

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by huangts123 at 2017-03-02 08:08:45
不是的啊。HPLC用的是Symmetry300 C4 5um 4.6*250mm色谱柱；UPLC用的是BEH300 C4,1.7um，2.1*100mm色谱柱...

那就找到原因了 不同的色谱柱出峰不一样是可以理解的，UPLC的两个峰应该是两个物质 只是你用HPLC检测的时候用的那个柱子可能对其中一个不敏感 所以检测不到 而你换了UPLC的柱子能检测到的东西变多了 这是情有可原的。
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22楼2017-03-02 11:33:56
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llx5262187

禁虫 (小有名气)
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2楼2017-02-21 16:06:20
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llw1986

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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huangts123: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-02-21 18:33:10
1. 你的强洗和弱洗用的什么？有没有放反了？
2. 如果怀疑过载了 这个是最好解决的，可以做几个稀释样品试一下就知道了，分别稀释10， 100， 1000等。直至不出现分叉
3. 溶剂效应的话可以用其实流动相组成来溶解样品
本身原因应该不太可能 毕竟你咋HPLC上出的峰没有分叉，当然不同仪器间出现差异也是可以理解的
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3楼2017-02-21 17:09:38
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huangts123

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by llx5262187 at 2017-02-21 16:06:20
过载的可能性最大，这个色谱柱一般进样量在2ul以下，浓度也不应该这么高。建议你稀释10倍，然后进样量降低。

如图所示，上图是UPLC流速为0.2ml/min的峰（同一样品），下图是发酵液（含有此蛋白质，浓度较低）流速为0.2ml/min的峰，下图的峰是不是可以看出此样品中浓度较低，但由于进样量大导致的？
同一蛋白在HPLC测的纯度>99%，而UPLC上出现峰裂分-1
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4楼2017-02-21 17:24:12
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