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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pIT2载体的双酶切
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[交流] pIT2载体的双酶切

请问，有谁用过噬菌体展示的pIT2载体？
我在用Nco I-Not-I酶切的时候，总是会切成smear。

1）我的体系是：
     10 ul pIT2
     0.1 ul  BSA （NEB 100*)
     2 ul  buffer 3 (NEB 10*）
     0.1 ul NotI
     0.1 ul NcoI
     37oC水浴2小时。

2）这样的酶切体系，切pET载体是没有问题的。

2) 我曾将buffer与pIT一起， 94度加热20min后再加酶，载体不能切动。但是，我分别加热载体与Buffer，再混合加酶，载体一样被切糊。

3)我也用过takara的酶，类似的体系，但现象与NEB同。

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-25 at 15:08 ]
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1楼 2008-12-19 10:15:38
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我以为会不会是我质粒中有DNA酶，加热可以让其变性。
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3楼2008-12-19 22:07:06
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ningluztt

铜虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
本人没做过噬菌体展示，但是酶切还是做过的，不明白为什么要加热到94度。是为了使酶失活吗？如果是的话建议采用别的方法，94度温度这么高双链都变性了
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2008-12-19 17:06:46
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