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[交流]
pIT2载体的双酶切
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请问，有谁用过噬菌体展示的pIT2载体？ 我在用Nco I-Not-I酶切的时候，总是会切成smear。 1）我的体系是： 10 ul pIT2 0.1 ul BSA （NEB 100*) 2 ul buffer 3 (NEB 10*） 0.1 ul NotI 0.1 ul NcoI 37oC水浴2小时。 2）这样的酶切体系，切pET载体是没有问题的。 2) 我曾将buffer与pIT一起， 94度加热20min后再加酶，载体不能切动。但是，我分别加热载体与Buffer，再混合加酶，载体一样被切糊。 3)我也用过takara的酶，类似的体系，但现象与NEB同。 [ Last edited by 350784478 on 2009-10-25 at 15:08 ] |
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