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kennyshi

银虫 (小有名气)

[求助] 请问TMB显色实验过程中,A液和B液直接混合就行吗?HRP采用什么溶剂溶解呢? 已有2人参与

求TMB显色实验的步骤,我在阿拉丁上买了TMB显色液 A液(3,3′,5,5′-四甲基联苯胺溶液), TMB显色液 B液(过氧化物溶液),还有HRP的冻干粉,求实验步骤!谢谢啦!
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一辈子能坚持做好几件事就够了
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花花贝

金虫 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kennyshi at 2017-02-22 16:53:52
谢谢,请问A,B液还需要稀释吗?我按1:1的比例将两滴混合在样品管,晃一下就变蓝了,随后加入溶解的HRP一滴,瞬间就变成棕黄色。很苦恼是不是试剂失效了,网上都说A,B混合后是无色的,而添加了HRP才会变成蓝色?...

AB混合是无色的 变蓝是不对的

发自小木虫Android客户端
6楼2017-02-22 18:00:15
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
A液和B液临用前按照试剂说明书按照比例进行混合配制,HRP的冻干粉可以用1XPBS配制,一般会加0.1-0.5%BSA作为保护剂
2楼2017-02-21 17:09:52
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kennyshi

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2017-02-21 17:09:52
A液和B液临用前按照试剂说明书按照比例进行混合配制,HRP的冻干粉可以用1XPBS配制,一般会加0.1-0.5%BSA作为保护剂

谢谢,请问A,B液还需要稀释吗?我按1:1的比例将两滴混合在样品管,晃一下就变蓝了,随后加入溶解的HRP一滴,瞬间就变成棕黄色。很苦恼是不是试剂失效了,网上都说A,B混合后是无色的,而添加了HRP才会变成蓝色?
一辈子能坚持做好几件事就够了
3楼2017-02-22 16:53:52
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by kennyshi at 2017-02-22 16:53:52
谢谢,请问A,B液还需要稀释吗?我按1:1的比例将两滴混合在样品管,晃一下就变蓝了,随后加入溶解的HRP一滴,瞬间就变成棕黄色。很苦恼是不是试剂失效了,网上都说A,B混合后是无色的,而添加了HRP才会变成蓝色?...

A,B液1:1的比例将两滴混合在样品管,晃一下就变蓝了,这个现象不太正常,可能是这两者的稀释比例不对,估计是显色液 A液浓度高了。
请按照A,B液的说明书进行配制,或者按照文献对应的两个主要成分浓度进行配制。
HRP一滴,瞬间就变成棕黄色这个更不正常了,估计是你HRP酶加多了,反应非常块就完了。

一滴滴加,这个也太粗犷了,用移液枪吧,酶一般都是加微升或者更小体积的,看你实验目的了
4楼2017-02-22 17:27:49
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