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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 请问TMB显色实验过程中，A液和B液直接混合就行吗？HRP采用什么溶剂溶解呢？
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kennyshi

银虫 (小有名气)

[求助] 请问TMB显色实验过程中，A液和B液直接混合就行吗？HRP采用什么溶剂溶解呢？ 已有2人参与

求TMB显色实验的步骤，我在阿拉丁上买了TMB显色液 A液（3,3′,5,5′-四甲基联苯胺溶液）, TMB显色液 B液（过氧化物溶液),还有HRP的冻干粉，求实验步骤！谢谢啦！
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一辈子能坚持做好几件事就够了
1楼 2017-02-20 15:32:59
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
A液和B液临用前按照试剂说明书按照比例进行混合配制，HRP的冻干粉可以用1XPBS配制，一般会加0.1-0.5%BSA作为保护剂
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2楼2017-02-21 17:09:52
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kennyshi

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2017-02-21 17:09:52
A液和B液临用前按照试剂说明书按照比例进行混合配制，HRP的冻干粉可以用1XPBS配制，一般会加0.1-0.5%BSA作为保护剂

谢谢，请问A,B液还需要稀释吗？我按1:1的比例将两滴混合在样品管，晃一下就变蓝了，随后加入溶解的HRP一滴，瞬间就变成棕黄色。很苦恼是不是试剂失效了，网上都说A,B混合后是无色的，而添加了HRP才会变成蓝色？
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一辈子能坚持做好几件事就够了
3楼2017-02-22 16:53:52
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by kennyshi at 2017-02-22 16:53:52
谢谢，请问A,B液还需要稀释吗？我按1:1的比例将两滴混合在样品管，晃一下就变蓝了，随后加入溶解的HRP一滴，瞬间就变成棕黄色。很苦恼是不是试剂失效了，网上都说A,B混合后是无色的，而添加了HRP才会变成蓝色？...

A,B液1:1的比例将两滴混合在样品管，晃一下就变蓝了，这个现象不太正常，可能是这两者的稀释比例不对，估计是显色液 A液浓度高了。
请按照A,B液的说明书进行配制，或者按照文献对应的两个主要成分浓度进行配制。
HRP一滴，瞬间就变成棕黄色这个更不正常了，估计是你HRP酶加多了，反应非常块就完了。

一滴滴加，这个也太粗犷了，用移液枪吧，酶一般都是加微升或者更小体积的，看你实验目的了
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4楼2017-02-22 17:27:49
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kennyshi

银虫 (小有名气)
哦，谢谢了，我先试试，我没有稀释A,B液，直接混合的，谢谢了

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一辈子能坚持做好几件事就够了
5楼2017-02-22 17:33:46
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花花贝

金虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kennyshi at 2017-02-22 16:53:52
谢谢，请问A,B液还需要稀释吗？我按1:1的比例将两滴混合在样品管，晃一下就变蓝了，随后加入溶解的HRP一滴，瞬间就变成棕黄色。很苦恼是不是试剂失效了，网上都说A,B混合后是无色的，而添加了HRP才会变成蓝色？...

AB混合是无色的 变蓝是不对的

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6楼2017-02-22 18:00:15
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kennyshi

银虫 (小有名气)
刚买试剂，准备试试效果，各取了一滴在样品管混合，开始还是无色的，随着晃动慢慢变蓝，随后加深，是试剂没有稀释的原因还是试剂本身就坏了呢

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一辈子能坚持做好几件事就够了
7楼2017-02-22 18:06:13
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边木殇

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
混合后应该避光处理吧，我们实验室是避光状态混合的，用的时候不能曝光太长时间
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8楼2017-02-22 20:04:19
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悦意生活

木虫 (职业作家)
加入HRP，由蓝色变为黄色，是因为加入HRP的量多了吗？还望楼主不吝赐教

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9楼2021-01-31 10:38:13
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