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xtmgah31

银虫 (小有名气)

[交流] PCR产物回收

今天用蓝罡的PCR产物回收试剂盒回收我的东西,后来发现,回收回来的东西放在-21度不会凝固,打开后一闻,有很浓的酒精味,真是郁闷死了,我是一步步按照试剂盒上的步骤操作的,两次洗涤后还换了管子空离了3min,竟然还会有乙醇的残留,以前都没碰到这样的情况。请问,我现在要怎么拯救我的PCR产物啊,这是我好不容易才P出来的?我的PCR产物是用来跑变性梯度凝胶电泳(DGGE)的,如果不作任何处理,DNA在含乙醇的容易中会坏掉吗?

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 15:14 ]
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eaglezheng

铁虫 (小有名气)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
pcr产物回收很好做,多半是你没有仔细阅读说明书,比如要求彻底晾干酒精,你没注意
2楼2008-12-18 22:50:17
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

…………
什么牌子啊
选国产至少也选天根啦~~~
3楼2008-12-18 23:40:29
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

天根也不是国产的啊 建议你在加水洗脱前 在超净台上吹30min 应该就可以去除乙醇
4楼2008-12-19 17:11:35
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

天根就是国产的
我知道很多人会把天根和QIAGEN混起来
完全不同档次的货……
5楼2008-12-19 17:23:26
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figo.339

木虫 (著名写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
洗脱前放置时间太少了,应该20分钟左右,以彻底晾干酒精
6楼2008-12-19 20:05:11
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

用好一点的试剂盒完全不用考虑这些问题………………
关键技术就是:
溶胶液是否能够保护DNA,是否能够保证凝胶彻底解体,QIAGEN的溶胶液就算放4度也能自发溶胶,不用加热
还有就是膜结合能力和特异性的技术
7楼2008-12-19 23:36:35
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jlcccs

木虫 (正式写手)

有点意思
8楼2008-12-21 19:50:20
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bone0611

可能是乙醇没吹干净,还有漂洗液加酒精的量是否正确
9楼2008-12-28 23:05:52
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

放置通风橱就可以了,不需要离心,乙醇挥发的很快的,之前可以先用微量的移液器吸一下。
PCR产物在任何溶剂里边都不能长期保存,很容易讲解的,建议不要长期保存,更不用说在乙醇里了
会当凌绝顶,一览众山小
10楼2008-12-28 23:34:42
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