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金线莲植物基因组DNA提取、纯化及PCR实验问题
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求助各位大神两个问题： 实验目的：我在做金线莲这种中草药植物基因组DNA提取的实验，然后特定序列PCR扩增后，对不同来源的药材做一个鉴别。 1、实验遇到的问题：买的是天恩泽的DNA提取试剂盒，可是提取出来后检测核酸浓度，才只有10ng/μl左右，而且在260nm处的吸收值只有0.2左右，280nm处的吸收值在0.1左右，A260/A280的比值只有1.4~1.5，不懂这些数据说明什么，同学说这个浓度就等于几乎没提出来，还是提取的DNA杂质量太多了？接下来应该从哪些方面着手，有什么好的纯化方法，可以通过酚、氯仿等来提纯吗？ 2、接着上面的实验继续说，提取出来基因组DNA后，计划的是选择ITS2这段基因，可是因为不知道在金线莲中这个序列的碱基组成，没法设计特定引物。同学让我用了他另外一种植物ITS2序列设计出来的引物，我用他这个引物按照购买的PCR试剂盒操作，凝胶成像结果显示，确实有扩增出来一个大约500bp的条带。可现在又有人说，因为这个不是针对我这种植物设计出的特定引物，即使扩增出来，有条带显示，但无法说明该条带是我的目的序列（也就是ITS2）所扩增出来的条带，所以我现在又有点困惑了…… 这样针对A植物ITS2序列设计的引物，能用于扩增B植物的ITS2序列吗？ 如果不可以的话，有没有对这方面比较了解的同学可以指导一下，我到底应该如何才能知道我这种植物某一特定基因的序列组成呢？ 查阅文献，大家做的比较多的是质粒DNA，或者是细胞、真菌的，关于植物的文献实在是没有找到相关的，小硕一枚，刚开始做分子生物学这块儿，实在是不懂的问题一堆，恳请各位答疑解惑啊，不胜感激！！！ |
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