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[求助]
金线莲植物基因组DNA提取、纯化及PCR实验问题
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求助各位大神两个问题: 实验目的:我在做金线莲这种中草药植物基因组DNA提取的实验,然后特定序列PCR扩增后,对不同来源的药材做一个鉴别。 1、实验遇到的问题:买的是天恩泽的DNA提取试剂盒,可是提取出来后检测核酸浓度,才只有10ng/μl左右,而且在260nm处的吸收值只有0.2左右,280nm处的吸收值在0.1左右,A260/A280的比值只有1.4~1.5,不懂这些数据说明什么,同学说这个浓度就等于几乎没提出来,还是提取的DNA杂质量太多了?接下来应该从哪些方面着手,有什么好的纯化方法,可以通过酚、氯仿等来提纯吗? 2、接着上面的实验继续说,提取出来基因组DNA后,计划的是选择ITS2这段基因,可是因为不知道在金线莲中这个序列的碱基组成,没法设计特定引物。同学让我用了他另外一种植物ITS2序列设计出来的引物,我用他这个引物按照购买的PCR试剂盒操作,凝胶成像结果显示,确实有扩增出来一个大约500bp的条带。可现在又有人说,因为这个不是针对我这种植物设计出的特定引物,即使扩增出来,有条带显示,但无法说明该条带是我的目的序列(也就是ITS2)所扩增出来的条带,所以我现在又有点困惑了…… 这样针对A植物ITS2序列设计的引物,能用于扩增B植物的ITS2序列吗? 如果不可以的话,有没有对这方面比较了解的同学可以指导一下,我到底应该如何才能知道我这种植物某一特定基因的序列组成呢? 查阅文献,大家做的比较多的是质粒DNA,或者是细胞、真菌的,关于植物的文献实在是没有找到相关的,小硕一枚,刚开始做分子生物学这块儿,实在是不懂的问题一堆,恳请各位答疑解惑啊,不胜感激!!! |
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