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cjdsm

谢谢了。。
11楼2009-04-20 20:17:34
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

(3)两种酶可以用同一种buffer。我可否将两种酶同时加入?
两种酶在同一种buffer下酶活是否一样?
如果不一样,最好先加酶活低的酶,混匀再加酶活高的酶。
再或者先加酶活低的酶酶切2.5-3h后,再加另外一种酶酶切同样长的时间。
Thank-you,so-blue.
12楼2009-04-20 21:03:30
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695

木虫 (职业作家)

楼主遇上高人了,好运气
13楼2009-04-21 00:33:10
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sykbod

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流! 6-1 12:01
引用回帖:
Originally posted by forget1997 at 2008-12-18 12:15:
我计划用双酶切我的PCR产物,和pGL3质粒,然后转化大肠杆菌JM109.如果顺利,转染重组质粒进入HepG2细胞。我有如下问题请教大家:
(1)PCR之后、酶切之前,是否要胶回收、或者清洗PCR产物?
(2)酶切的时候,要 ...

双酶切你去查公用buffer 在公用buffer里活性都不错的话就一起加进去,不要做2个单酶切了,回收2次损失很大。

HepG2细胞贴壁不是很容易消化下来,通常我0.1%Trip需要用2min来消化
所以你开始传细胞的时候就把培养液拿出来放在酒精灯附近就行了
消化细胞不建议放到培养箱里去,很容易过头,而且效果不那么好,不缺那一点时间,而且从超净台拿到培养箱还增加污染的机会。

可以不预热,因为肿瘤细胞比较皮实,我们在不转染只是维持细胞的情况下都是不预热的,但是要转染之前几天会好好调整一次细胞状态

另外 建议用6well板 比较好种匀
14楼2009-06-01 10:16:45
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juke9910

铜虫 (初入文坛)

看看酶的说明书,公用BUFFER可以去网站查。自己可以设计下
15楼2009-06-01 11:55:41
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

提个建议:在试剂的说明书都有比较好的方案,可以根据说明实验
16楼2009-06-01 12:02:42
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