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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶切、连接、转化求助
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cjdsm

谢谢了。。
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11楼2009-04-20 20:17:34
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
（3）两种酶可以用同一种buffer。我可否将两种酶同时加入？
两种酶在同一种buffer下酶活是否一样？
如果不一样，最好先加酶活低的酶，混匀再加酶活高的酶。
再或者先加酶活低的酶酶切2.5-3h后，再加另外一种酶酶切同样长的时间。
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Thank-you，so-blue.
12楼2009-04-20 21:03:30
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695

木虫 (职业作家)
楼主遇上高人了，好运气
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13楼2009-04-21 00:33:10
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sykbod

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-1 12:01
引用回帖:
Originally posted by forget1997 at 2008-12-18 12:15:
我计划用双酶切我的PCR产物，和pGL3质粒，然后转化大肠杆菌JM109.如果顺利，转染重组质粒进入HepG2细胞。我有如下问题请教大家：
（1）PCR之后、酶切之前，是否要胶回收、或者清洗PCR产物？
（2）酶切的时候，要 ...

双酶切你去查公用buffer 在公用buffer里活性都不错的话就一起加进去，不要做2个单酶切了，回收2次损失很大。

HepG2细胞贴壁不是很容易消化下来，通常我0.1%Trip需要用2min来消化
所以你开始传细胞的时候就把培养液拿出来放在酒精灯附近就行了
消化细胞不建议放到培养箱里去，很容易过头，而且效果不那么好，不缺那一点时间，而且从超净台拿到培养箱还增加污染的机会。

可以不预热，因为肿瘤细胞比较皮实，我们在不转染只是维持细胞的情况下都是不预热的，但是要转染之前几天会好好调整一次细胞状态

另外 建议用6well板 比较好种匀
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14楼2009-06-01 10:16:45
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juke9910

铜虫 (初入文坛)
看看酶的说明书，公用BUFFER可以去网站查。自己可以设计下
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15楼2009-06-01 11:55:41
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
提个建议：在试剂的说明书都有比较好的方案，可以根据说明实验
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16楼2009-06-01 12:02:42
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