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T4连接求助
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我的双酶切·连接一直出状况。我的体系一般用7ul目的片段，3ul载体，2ul takara的T4，1.33ul，buffer。酶切后胶回收用的是qiagen的试剂盒，回收浓度只有10ng/ul左右。4度连接。连接后很多次没有菌落，虽然偶尔会得到阳性克隆，但是数量极少，给我现在和以后的工作造成很大困扰。现在连接前肯定会做连接酶的活性测定，保证没有问题，其次感受态连接前也测试过。请各位给点建设性的意见，其他建议比如连接目的片段和载体的比例我都测过，对我的结果并没有什么改观。 [ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 15:17 ] |
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