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T4连接求助
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我的双酶切·连接一直出状况。我的体系一般用7ul目的片段,3ul载体,2ul takara的T4,1.33ul,buffer。酶切后胶回收用的是qiagen的试剂盒,回收浓度只有10ng/ul左右。4度连接。连接后很多次没有菌落,虽然偶尔会得到阳性克隆,但是数量极少,给我现在和以后的工作造成很大困扰。现在连接前肯定会做连接酶的活性测定,保证没有问题,其次感受态连接前也测试过。请各位给点建设性的意见,其他建议比如连接目的片段和载体的比例我都测过,对我的结果并没有什么改观。 [ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 15:17 ] |
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6楼2009-01-07 01:28:17
bbyu007
木虫 (正式写手)
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2楼2008-12-16 15:28:58
三磷酸腺苷
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3楼2008-12-16 16:14:59

4楼2008-12-17 19:52:10











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