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vulture1206铜虫 (初入文坛)
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重组载体准备 已有3人参与
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小弟准备构建一个表达载体：使用pET-44a载体， Pst I 和Sal I内切酶。可是Novagen的说明书说用3ug的载体来消化用于连接目的基因。可是我们实验的载体是以plasmid的形式保存的，而且浓度是30ng/ul。请问大虫们，这个是要怎么整？ 还有，我把载体消化、跑胶之后回收，为什么浓度会低到只有8ng/ul？我用来消化的载体量有1ug左右。乙醇沉淀没办法浓缩，已经尝试过很多次了。 求助啊…… |
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vulture1206
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4楼2017-02-08 12:51:13
原海亮
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-02-07 18:23:34
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-02-07 18:23:34
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不清楚你连接后转化的宿主是什么菌，对载体连接体系各成分的浓度要求这么精确么？看你用的pet载体，应该是连接转化大肠吧，这个感觉是没有必要纠结这么细节的要求，当然载体和片段酶切处理那一步保证酶切完全很重要，其他的载体回收后浓度降低很多都不是大问题呀，平时的实验中，载体2微升的电泳图可以看到有条带，隐隐约约都可以的，取1微升用于连接就可以，按说明书把握各个细节，会很纠结，并且严重影响实验效率。熟练之后，其实大家都不怎么去关注过片段的精确浓度，电泳大概估算即可。祝好。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-02-07 00:30:51
kangaroo0513
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3楼2017-02-07 15:58:53
vulture1206
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5楼2017-02-08 12:53:13