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Nigori

铜虫 (小有名气)

[交流] 人脐动脉平滑肌细胞培养实验 已有2人参与

人脐动脉平滑肌细胞培养可以:

(1)获得人脐动脉平滑肌细胞;

(2)作为重大动脉疾病的研究底物;

(3)研究血管模型;

(4)对血管疾病的药理学和治疗继续提供信息。

实验方法原理

运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。

实验材料   脐带

试剂、试剂盒:胶原酶消化液、胰蛋白酶、胶原酶、弹性蛋白酶、DMEM

仪器、耗材:眼科剪、滴管、离心机、培养皿、CO2培养箱

实验步骤

1.  冰冷无菌D-Hanks’液中漂洗,用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等组织,转入青霉素小瓶中,加入少量无菌D-Hanks’液,用眼科剪剪成0.1-1.0 mm3 大小的碎片。
 
2.  用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴,再用无菌D-Hanks’液反复清洗8~10 次。
 
3.  加入 10 倍体积无菌胶原酶消化液(1  mg/mL),室温消化30 min,1000 rpm离心 5 min,弃上清,加1 mg/mL胰蛋白酶 37℃消化 20 min,再次离心5 min,弃上清。
 
4.  加入胰蛋白酶 37℃消化20 min,再次离心5 min,弃上清。
 
5.  加胶原酶(1 mg/mL)弹性蛋白酶(0.5 mg/mL) 混合消化液 37℃消化 20 min,再离心5 min,弃消化液。
 
6.  加混合消化液 37℃消化 20 min,再次离心 5 min,细胞加含 10% FBS的DMEM培养基重悬,转入培养皿 37℃、5% CO2培养箱中培养即可。
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2楼2017-02-10 14:04:36
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atto-bio

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议使用德国爱拓生物最新推出的含动脉组织特异性基质成分细胞培养添加剂,细胞状态会明显改善。
3楼2017-12-08 19:35:53
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