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Nigori

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[交流] 人脐动脉平滑肌细胞培养实验已有2人参与

人脐动脉平滑肌细胞培养可以：

（1）获得人脐动脉平滑肌细胞；

（2）作为重大动脉疾病的研究底物；

（3）研究血管模型；

（4）对血管疾病的药理学和治疗继续提供信息。

实验方法原理

运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养，并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。

实验材料 脐带

试剂、试剂盒：胶原酶消化液、胰蛋白酶、胶原酶、弹性蛋白酶、DMEM

仪器、耗材：眼科剪、滴管、离心机、培养皿、CO2培养箱

实验步骤

1. 冰冷无菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0 mm3 大小的碎片。

2. 用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks’液反复清洗8~10 次。

3. 加入 10 倍体积无菌胶原酶消化液(1 mg/mL)，室温消化30 min，1000 rpm离心 5 min，弃上清，加1 mg/mL胰蛋白酶 37℃消化 20 min，再次离心5 min，弃上清。

4. 加入胰蛋白酶 37℃消化20 min，再次离心5 min，弃上清。

5. 加胶原酶(1 mg/mL)弹性蛋白酶(0.5 mg/mL) 混合消化液 37℃消化 20 min，再离心5 min，弃消化液。

6. 加混合消化液 37℃消化 20 min，再次离心 5 min，细胞加含 10% FBS的DMEM培养基重悬，转入培养皿 37℃、5% CO2培养箱中培养即可。

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