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yuanshao

银虫 (小有名气)

[交流] 求教:关于植化的粗分,高手帮忙解答,谢过

我做一种花的植化部分,刚刚上任手生,就是系统萃取完之后,石油醚和乙酸乙酯部分的粗分该怎样进行?我看好多资料都是先梯度洗脱,
1.梯度洗脱怎样选系统?
2.如果上硅胶柱进行粗分怎样确定梯度洗脱的比例变化范围?
3.分几个梯度比较好?
4.每个梯度用淋洗剂的量怎样确定?
请各位高手逐一解答(务必都解答)。本虫在此谢过。金币不多,不成敬意。大家可以继续发言讨论,就算是帮众多提取分离新手解惑吧。
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海到无边天作岸, 山登绝顶我为峰!!!
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yuanshao

银虫 (小有名气)

乙酸乙酯的粗分是干发上柱好还是湿法上好?
海到无边天作岸, 山登绝顶我为峰!!!
9楼2008-12-18 11:37:48
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查看全部 12 个回答

独步青云

新虫 (职业作家)

术中小生

★ ★ ★ ★
clkk216(金币+1,VIP+0):辛苦了~! 谢谢 ~!
yuanshao(金币+3,VIP+0):谢谢答复,还有问题请指教
我就自己的体会和你交流下吧。
1.一般来说,四个萃取部位中以乙酸乙酯最好分,因为里面多为中等极性化合物,所用洗脱系统比较典型,而且洗脱出来的化合物也比较容易结晶出来。所以一般先分乙酸乙酯部位。常的就是氯仿-丙酮、氯仿-甲醇或者氯仿-丙酮-甲醇系统。原则就是看你选的系统从100:1开始洗,最上面的点能跑到什么位置,最好RF在0.1左右。最后到1:1左右时最后的点能不能推出去。石油醚系统比较难分,一般用到环已烷-苯等毒性比较大。
2.比例一般来说也是程序的,我们实验室常用的,100:1,100:2,100:5,9:1,85:15,8:2,7:3,1:1等。注意刚开始的梯度变化要小,以后逐渐增大。虽然是粗分,粗分分得好,合并得当的话,一个柱子冲下几个化合物来也是很常见的。
3.梯度选用就如上所说的了。当然这个也不是绝对化的。
4.一般每个洗脱剂用4-6柱体积,当然也要结合TLC来定,如果有一大量的东西在下的话,就不要急于换梯度。柱体积是指的材料的空隙体积,一般用所用硅胶量乘以0.23左右。
以上仅是个人经验之谈,希望对你有所帮助。
2楼2008-12-15 16:08:50
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yuanshao

银虫 (小有名气)

很感谢,那我在做乙酸乙酯粗分前是不是应该用各梯度先跑一下TLC?有一种说法是在薄层条件摸好的情况下上柱时的极性再减低,这适用于梯度洗脱吗?
海到无边天作岸, 山登绝顶我为峰!!!
3楼2008-12-16 11:44:11
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lqqm

银虫 (小有名气)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
在分离的过程中,TLC应该是贯穿整个实验的始终的,基本上任何一个分离步骤之前和进行中都要伴随TLC的指导,这应该算是最简便快捷的方法了
4楼2008-12-16 12:27:56
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