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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转染的时候，质粒和转染试剂加的顺序
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华西Aspirin

新虫 (初入文坛)

[交流] 转染的时候，质粒和转染试剂加的顺序 已有6人参与

转染的时候，是质粒加到转染试剂(如lipo)还是转染试剂加到质粒中，因为在用fermentas的时候，是直接混合，没有分管稀释的，所以转染试剂先加就不用换枪头，如果质粒先加就需要换枪头。但是加的顺序对转染的影响还是要考虑的。。

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1楼 2017-01-22 12:49:54
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小静儿000

新虫 (初入文坛)
★
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这是诺唯赞的转染试剂说明书，你可以参考看看
转染的时候，质粒和转染试剂加的顺序
转染.png
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2楼2017-01-22 15:55:16
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engreen2016

禁虫 (正式写手)
★
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3楼2017-04-28 10:57:16
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lcree

新虫 (初入文坛)
★
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直接按照说明书操作就好。我们实验室以前用过一款DeofectEU真核细胞质粒DNA转染试剂。操作挺方便的，转染过程中不需要换液，性价比不错。你可以试试。
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4楼2018-09-20 15:18:26
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)
★
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通常是将一定量质粒DNA与培养基混合，然后将RFect与培养基混合，然后将两个混合物混合，导师告诉我们要将前者往后者里加，不能颠倒。
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5楼2018-12-17 09:24:06
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别踩我的菜

新虫 (小有名气)
★
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我们一般都是直接按照说明书操作的，方法步骤如下:  
贴壁/悬浮细胞瞬时转染操作流程(以24孔板转染为例)
A. 细胞接种:
1.转染前24小时左右对细胞进行转接，接种密度约为每孔0.3~1×105个细胞；
2.过夜培养。
B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染):
1.在1.5 ml无菌离心管中加入50μl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(2~5μl/μg DNA，参见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。
2.在1.5 ml无菌离心管中加入50μl无血清培养基，并添加适量的DNA (0.8~1μgDNA/孔， 参见附表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。
3.将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。注意： DeofectEU-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。
C.转染:
注意：DeofectEU 在完全培养基中(基础培养基中添加血清)具有最高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清培养基。
1.如特殊情况，可在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致的细胞死亡。
2.将步骤B制备的复合物滴加至培养基中。轻轻晃动培养皿以使复合物均匀分布。
3.过夜培养24~48小时。
4.注意:如果转染后需要更换新鲜培养基，请于加入DeofectEU /DNA复合物12~24小时后进行。培养基更换后，孵育24~48小时后再进行后续实验。
5.收获细胞，进行后续实验。
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6楼2019-03-11 14:43:10
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Explor

新虫 (正式写手)
★
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百代的RFectSP Plasmid 使用非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液。具体你可以参照说明书，或者咨询www.biodai.com.cn看看。
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7楼2019-10-29 13:56:14
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Explor

新虫 (正式写手)
★
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多发了sorry
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个性化基因研究、科研试剂、诊断试剂和实验服务
8楼2019-10-29 15:23:02
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