| 查看: 7003 | 回复: 7 | |||
[交流]
转染的时候，质粒和转染试剂加的顺序已有6人参与
|
|
转染的时候，是质粒加到转染试剂(如lipo)还是转染试剂加到质粒中，因为在用fermentas的时候，是直接混合，没有分管稀释的，所以转染试剂先加就不用换枪头，如果质粒先加就需要换枪头。但是加的顺序对转染的影响还是要考虑的。。 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有74人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2017-01-22 15:55:16
engreen2016
禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2017-04-28 10:57:16
4楼2018-09-20 15:18:26
5楼2018-12-17 09:24:06
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
我们一般都是直接按照说明书操作的，方法步骤如下: 贴壁/悬浮细胞瞬时转染操作流程(以24孔板转染为例) A. 细胞接种: 1.转染前24小时左右对细胞进行转接，接种密度约为每孔0.3~1×105个细胞； 2.过夜培养。 B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染): 1.在1.5 ml无菌离心管中加入50μl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(2~5μl/μg DNA，参见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。 2.在1.5 ml无菌离心管中加入50μl无血清培养基，并添加适量的DNA (0.8~1μgDNA/孔， 参见附表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。 3.将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。注意： DeofectEU-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。 C.转染: 注意：DeofectEU 在完全培养基中(基础培养基中添加血清)具有最高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清培养基。 1.如特殊情况，可在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致的细胞死亡。 2.将步骤B制备的复合物滴加至培养基中。轻轻晃动培养皿以使复合物均匀分布。 3.过夜培养24~48小时。 4.注意:如果转染后需要更换新鲜培养基，请于加入DeofectEU /DNA复合物12~24小时后进行。培养基更换后，孵育24~48小时后再进行后续实验。 5.收获细胞，进行后续实验。 |
6楼2019-03-11 14:43:10
Explor
新虫 (正式写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1554.8
- 散金: 88
- 红花: 2
- 帖子: 775
- 在线: 168.8小时
- 虫号: 8160133
- 注册: 2018-03-05
- 专业: 生物化学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
| 百代的RFectSP Plasmid 使用非常方便，先将转染试剂与质粒DNA混合，再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液。具体你可以参照说明书，或者咨询www.biodai.com.cn看看。 |
7楼2019-10-29 13:56:14
Explor
新虫 (正式写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1554.8
- 散金: 88
- 红花: 2
- 帖子: 775
- 在线: 168.8小时
- 虫号: 8160133
- 注册: 2018-03-05
- 专业: 生物化学
8楼2019-10-29 15:23:02