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转染的时候，质粒和转染试剂加的顺序已有6人参与
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转染的时候，是质粒加到转染试剂(如lipo)还是转染试剂加到质粒中，因为在用fermentas的时候，是直接混合，没有分管稀释的，所以转染试剂先加就不用换枪头，如果质粒先加就需要换枪头。但是加的顺序对转染的影响还是要考虑的。。 发自小木虫Android客户端 |
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我们一般都是直接按照说明书操作的，方法步骤如下: 贴壁/悬浮细胞瞬时转染操作流程(以24孔板转染为例) A. 细胞接种: 1.转染前24小时左右对细胞进行转接，接种密度约为每孔0.3~1×105个细胞； 2.过夜培养。 B. DeofectEU /DNA复合物包装(该步完成后应立即转染): 1.在1.5 ml无菌离心管中加入50μl无血清培养基，并添加适量的转染试剂(2~5μl/μg DNA，参见下表) 。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。 2.在1.5 ml无菌离心管中加入50μl无血清培养基，并添加适量的DNA (0.8~1μgDNA/孔， 参见附表)。用移液器轻轻混匀后在室温静置5~10分钟。 3.将DeofectEU-培养基混合物滴加至DNA-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀后在室温静置15~20分钟后，立即转染。注意： DeofectEU-培养基混合物和DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。 C.转染: 注意：DeofectEU 在完全培养基中(基础培养基中添加血清)具有最高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清培养基。 1.如特殊情况，可在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致的细胞死亡。 2.将步骤B制备的复合物滴加至培养基中。轻轻晃动培养皿以使复合物均匀分布。 3.过夜培养24~48小时。 4.注意:如果转染后需要更换新鲜培养基，请于加入DeofectEU /DNA复合物12~24小时后进行。培养基更换后，孵育24~48小时后再进行后续实验。 5.收获细胞，进行后续实验。 |
6楼2019-03-11 14:43:10
2楼2017-01-22 15:55:16
engreen2016
禁虫 (正式写手)
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本帖内容被屏蔽 |
3楼2017-04-28 10:57:16
4楼2018-09-20 15:18:26