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关于大肠杆菌发酵放大的问题 已有1人参与
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各位大神好，小女子最近在做大肠杆菌表达重组蛋白的5 L罐发酵。 之前摸索的小摇瓶产量一直都比较稳定，但是放大之后产量几乎和小摇瓶差不多，没有见到明显的增多。 之前不了解发酵，所以不知道到底有哪些关键的因素（难道是溶氧问题吗）影响放大？ 此外，我的重组蛋白是采用信号肽分泌到周质空腔里的，而且蛋白质自身含有二硫键，所以，溶解氧对二硫键的折叠有帮助吗，帮助效果有多大？ 而且还有一个有意思的是，我在培养基里尝试加一些渗透剂，如甘氨酸、蔗糖之类的，发现摇瓶上清的产量反而比不添加的要低。 所以想问下大家，渗透剂的加入量一般是多少？ 请各位路过的大神，指点迷津~~~ |
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【答案】应助回帖
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题主你好。讨论一下 1. 之前摸索的小摇瓶产量一直都比较稳定，但是放大之后产量几乎和小摇瓶差不多，没有见到明显的增多。 上罐的菌浓怎么样，菌株生长状况是否稳定。一般菌浓增加上来才能保证放大效果，但也不绝对。 2. 到底有哪些关键的因素（难道是溶氧问题吗）影响放大？ 溶氧是一方面，pH，温度，补料......都有影响的，关键在于发酵控制条件使之适应菌的生长，把菌宝宝伺候好了。 3. 溶解氧对二硫键的折叠有帮助吗，帮助效果有多大？ 这个不大了解。蛋白既然分泌到周质空间，氧就不是限制因素了（？） 4. 加一些渗透剂，如甘氨酸、蔗糖之类的，发现摇瓶上清的产量反而比不添加的要低。 有没有必要加渗透剂？我觉得这一点题主要发表文章，可能会被人问到的。题主有没有做过细胞破碎，测定上清蛋白与胞内蛋白的比例？如果上清本身就占9成半以上甚至更高，是没有必要改变通透性的。提高细胞外模通透性的试剂有EDTA、甘氨酸、Triton X-100，Mg离子、Ca离子......都有相关的文献专利可供参考，用量是可查的。 祝顺利。 |
枫叶留殇2楼2017-01-22 12:42:48
3楼2017-01-23 10:52:35