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LYF_feng

新虫 (初入文坛)

[求助] 老师,您好!我是初入生物实验室,刚开始做细胞实验。我养的HF... 已有1人参与

老师,您好!我是初入生物实验室,刚开始做细胞实验。我养的HFF细胞和人脐带血细胞长不起来,状态也不是很好。HFF细胞用的培养基是1640,人脐带血细胞的是DMEM,都含有10%血清。请问老师,细胞长得慢,可能是什么原因,有什么建议 @gyesang

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张金猪

新虫 (初入文坛)

你好,我也是去年才入门,到现在吸收了一些经验教训,希望能帮到你。我觉得长得慢可能跟你seeding的细胞密度有关,还有你用的是什么血清,培养过程中是否有contamination,或者还可能你手里的细胞本身就不太好。建议可以先看看细胞培养的书。个人拙见,希望不要嫌弃。

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2楼2017-01-18 01:06:39
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LYF_feng

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 紫凝玲雨 at 2017-01-18 14:21:10
你可以加大那个培养基的密度,10ml的培养基中加入1.5ml的细胞悬混液,或者你消化细胞的时候,不用胰酶,看看行不行

不用胰酶的话,吹打不下来

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5楼2017-01-18 15:03:40
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cho-123

新虫 (小有名气)

细胞状态不好的原因有很多:第一,传代动作过于粗暴(消化过度,吹打过度):第二,细胞传代后不要总是拿出来看,密度也应该大一些:第三,建议传代第二天换液。ps,不知道你具体怎么传代

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8楼2017-01-21 18:01:32
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紫凝玲雨

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以加大那个培养基的密度,10ml的培养基中加入1.5ml的细胞悬混液,或者你消化细胞的时候,不用胰酶,看看行不行

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3楼2017-01-18 14:21:10
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LYF_feng

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 张金猪 at 2017-01-18 01:06:39
你好,我也是去年才入门,到现在吸收了一些经验教训,希望能帮到你。我觉得长得慢可能跟你seeding的细胞密度有关,还有你用的是什么血清,培养过程中是否有contamination,或者还可能你手里的细胞本身就不太好。建议 ...

传代是按1:4传的,第一次传代长得还可以,第二次传代就长得慢了。血清是南美的。培养过程没有污染。感谢帮助与建议

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4楼2017-01-18 15:02:04
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紫凝玲雨

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by LYF_feng at 2017-01-18 15:03:40
不用胰酶的话,吹打不下来
...

那你可以缩短消化时间,普通细胞不是消化3分钟吗,那你消化1分钟,或者1.5分钟这样试试,因为细胞不好养的话,消化时间太长了对细胞不好

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6楼2017-01-18 18:10:09
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LYF_feng

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 紫凝玲雨 at 2017-01-18 18:10:09
那你可以缩短消化时间,普通细胞不是消化3分钟吗,那你消化1分钟,或者1.5分钟这样试试,因为细胞不好养的话,消化时间太长了对细胞不好
...

好的,谢谢你的建议

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7楼2017-01-18 18:41:09
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xiaoegg

金虫 (初入文坛)

我科室养HFF细胞用10%FBS+DMEM+1%单抗,0.25%胰酶消化30s,800转离心5min.只要原代细胞没问题,其它就没什么。要是想长得快,加大细胞量就好。我基本是一瓶T25传10瓶T25。

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9楼2017-01-22 11:09:54
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生物公司

新虫 (初入文坛)

内容已删除
10楼2017-02-28 22:13:46
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