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laimin15

无虫 (小有名气)

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[交流] 【求助】如何观察细胞在材料上的生长情况

朋友们：我做的是细胞在厚度为2毫米的钛片上的生长情况，材料不透光想问一下大家如何观察细胞在材料上的形态？
1、用扫描电镜的话，如何固定细胞?有什么注意的细节？扫描电镜比较贵，我想一次成功，所以请做过的同学，给点建议！
2、用激光共聚焦的话可以嘛？
谢谢！

[ Last edited by zhangwj on 2008-12-14 at 11:16 ]

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1楼 2008-12-14 08:57:29

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zouqin8091

铜虫 (初入文坛)

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专业: 组织工程学

用SEM观察细胞在材料表面生长的详细实验步骤

★ ★
wgcui(金币+2,VIP+0):欢迎多多评论！ 3-17 09:42

SEM（细胞粘附）实验方法：
1．细胞接种到材料上；
2．4,7,（3,5）天取样；
3．吸弃原有培养基；
4．加入1mLPBS培养基吹洗材料* 3次（长在材料表面的细胞不会掉）
5．吸弃PBS加入2.5-3.0% 戊二醛（固定2.5－3h）；
6．吸弃戊二醛,30%,50%,75%,80%,95%,100%(两次)梯度乙醇脱水（15min/次）；
7．在玻璃瓶中乙酸异戊酯替换（大于30min）；
8．临界点干燥后送扫描电镜观察。

SEM试验注意事项：
1.戊二醛现配现用；
2.用乙酸异戊酯替换时必须使用玻璃瓶；

########特别要注意的是，在处理的过程中材料常常会翻面，一定要记住你的细胞长在材料的哪一面，最好把材料做成特殊的形状，做好记录，观察的时候才不会浪费时间和金钱。