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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 刚开始做q-PCR， 提取总RNA， OD值很低。
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hiang2627

新虫 (初入文坛)

[求助] 刚开始做q-PCR， 提取总RNA， OD值很低。 已有1人参与

我做的样本是耳前庭与椭圆囊、球囊。提取总RNA之后，测了OD值。
            
A260/A280：1.463
A260/A230：0.914
浓度(ng/ul): 235.2

测了三次纯度都很低，之后做过电泳跑胶，有两条比较清晰的条带。我老师说也许样本含量太少所以OD值很低。
我在网上查说是蛋白污染。第一次做，不太懂是怎么一回事儿。求指导。
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1楼 2017-01-17 12:30:20
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小静儿000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室也是做耳蜗相关实验研究的，我每次提取的RNA的两比值都还好哇，在1,8-2.0范围内，你的RNA浓度其实不低了。不知道你用什么方法提取的，是经典的Trizol法吗？我们用的是诺唯赞的Trizol试剂，很便宜，很好用。
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2楼2017-01-17 16:04:49
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hiang2627

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小静儿000 at 2017-01-17 16:04:49
我们实验室也是做耳蜗相关实验研究的，我每次提取的RNA的两比值都还好哇，在1,8-2.0范围内，你的RNA浓度其实不低了。不知道你用什么方法提取的，是经典的Trizol法吗？我们用的是诺唯赞的Trizol试剂，很便宜，很好用 ...

我们是用 Isogen ii 做。椭圆囊和球囊椭圆囊太小了，我是加了4-6个样品到一个tube里，还加着一些Hanks buffer。是不是这个问题呢？我们实验室老师直接把内耳给捣碎做q-PCR,他的结果还可以。但是，有太多的其他组织，耳蜗啊，膜啊，骨头啊 之类的。你们是怎么做的呢？
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3楼2017-01-17 17:31:46
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小静儿000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hiang2627 at 2017-01-17 17:31:46
我们是用 Isogen ii 做。椭圆囊和球囊椭圆囊太小了，我是加了4-6个样品到一个tube里，还加着一些Hanks buffer。是不是这个问题呢？我们实验室老师直接把内耳给捣碎做q-PCR,他的结果还可以。但是，有太多的其他组织 ...

我没用过你用的试剂，但看了一下产品说明，个人觉得，这种方法提取的RNA纯度会不高。你如果想进一步纯化RNA的话，建议还是用酚氯仿抽提一次。
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hiang2627
4楼2017-01-18 09:51:22
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hiang2627

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小静儿000 at 2017-01-18 09:51:22
我没用过你用的试剂，但看了一下产品说明，个人觉得，这种方法提取的RNA纯度会不高。你如果想进一步纯化RNA的话，建议还是用酚氯仿抽提一次。...

我再用酚氯仿抽提一次看看，谢谢你的建议。
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5楼2017-01-18 18:33:42
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锟街伙拷锟矫伙�

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
hiang2627(myprayer代发): 金币+3, 鼓励积极发帖交流，为分子生物版块的发展添砖加瓦。 2019-10-12 19:51:43
就260/280的比值来看偏低（以1.9-2.1比较为宜），建议可以尝试用Trisol法提取。

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6楼2019-10-12 08:40:15
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