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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr空白对照老是出现两条带，怎么回事？
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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)

[求助] pcr空白对照老是出现两条带，怎么回事？ 已有6人参与

最下面的一条应该是引物二聚体，那上面的那条呢？都是小于100bp的，做了好多次经常是这样的结果，也有时候只出现最下面的那条引物二聚体条带

pcr空白对照老是出现两条带，怎么回事？


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哈哈
1楼 2017-01-11 09:22:59
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像鱼一样飞吧

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好，我曾经也是遇到过这样的情况，也是153bp的条带，空白对照老是出现跟正常条带一样的条带产物。起初我以为是我操作的不规范造成的，但是事实上我请师兄师姐做也是这样的情况，然后我问老师他放大之后给我看我的条带是不是在一条直线上，放大之后发现果然不在一条直线上，所以我老师我做的没有问题。我表面上同意了他的观点，但是我一直在找原因，如果您解决了这个问题，可以跟我交流一下么？先谢谢您！另外，因为我们的片段很小，如果您和我一样用的是ex-tag酶的话，我建议您有条件的话可以用高保真pfu酶试验一下，因为据说ex-taq酶容易发生突变，具体我也不太清楚了，我的老师也不让我跟进这个试验了！
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15楼2017-01-12 10:57:25
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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)
没人吗？

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哈哈
2楼2017-01-11 09:53:21
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夏冰莲

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-13 21:09:59
你提的DNA 电泳图怎么样？小分子条带多吗？？可以给模板跑个电泳，看看浓度是不是太大，稀释一下再做PCR

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guishuai_tj
3楼2017-01-11 09:54:26
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guishuai_tj

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏冰莲 at 2017-01-11 09:54:26
你提的DNA 电泳图怎么样？小分子条带多吗？？可以给模板跑个电泳，看看浓度是不是太大，稀释一下再做PCR

这是我提取的dna的电泳图，用试剂盒提取的，都是小于100的片段，但是我用它做pcr也p出过两次100多的目的片段，说明含有100以上的，只是含量比较少，后来再p的时候不知道怎么回事就p不出来了。现在遇到俩问题一个是目的片段老是出不来，另一个就是老是p出图上的那个引物二聚体上面的亮条带
pcr空白对照老是出现两条带，怎么回事？-1



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4楼2017-01-11 10:54:20
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